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ELISA法手工測定的影響因素
閱讀：2459 發(fā)布時間：2022-1-12ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng),、重復(fù)性好的特點(diǎn),，并具有操作簡便、無放射性危害的優(yōu)點(diǎn),，因而多年來廣泛應(yīng)用于血站和醫(yī)院的實(shí)驗(yàn)室中,，但在測定中常會出現(xiàn)一些誤差和問題。我們通過幾年的實(shí)驗(yàn)觀察,，認(rèn)為影響結(jié)果的因素有如下方面,。
1 試劑盒
（1）抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價降低或失活,，結(jié)果不易判斷,。再有ELISA法靈敏度高，對雜質(zhì)的反應(yīng)靈敏度也高,，實(shí)驗(yàn)中空白對照OD值偏高或假陽性,。（2）酶結(jié)合物濃度過高，也會導(dǎo)致OD值假性增高,。
2 試驗(yàn)儀器
（1）加樣器是否經(jīng)過校正,，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好,，吸取樣品不精確,，會使結(jié)果忽高忽低。（2）每次洗板前,，應(yīng)檢查洗板機(jī)針孔有無堵塞,。
3 操作
（1）檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏,，以免造成試驗(yàn)結(jié)果假性降低,。（2）加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體（抗原）脫落而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。（3）洗滌不充分,，會使結(jié)果假性增高，過分洗滌呈假陰性,。（4）比色時應(yīng)保持包被孔底部無異物,、無水汽,，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時，底部留有水汽,，應(yīng)將板底擦干后進(jìn)行比色,，水汽或孔內(nèi)氣泡也會使OD值升高。（5）抗原與抗體反應(yīng)達(dá)到*平衡,，依賴于溫度與時間,。溫度高于45℃易引起失活及標(biāo)記物脫落，溫度低于4℃,，影響反應(yīng)速度,。總之,，由于ELISA實(shí)驗(yàn)的影響因素較多,，在實(shí)際工作中必須操作規(guī)范、仔細(xì),，避免和排除各種因素的影響,，使之得到準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果。