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酶免疫分析——技術(shù)進(jìn)步與自動(dòng)化
閱讀：985 發(fā)布時(shí)間：2021-10-12酶免疫分析（Enzyme Immunoassay,EIA）是標(biāo)記免疫分析中的一項(xiàng)重要技術(shù),是以酶標(biāo)記的抗體（抗原）作為主要試劑,，將抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶催化底物反應(yīng)的高效性和專一性結(jié)合起來(lái)的一種免疫檢測(cè)技術(shù),。作為經(jīng)典的三大標(biāo)記技術(shù)之一,酶免疫技術(shù)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中得到廣泛應(yīng)用并不斷得到更新，不斷和其他先進(jìn)技術(shù)如熒光,、發(fā)光技術(shù)以及儀器自動(dòng)化相融合,，日臻完善,許多自動(dòng)化儀器實(shí)際上是EIA技術(shù)和其他現(xiàn)代化技術(shù)的復(fù)合體，其分析敏感度已達(dá)到甚至大大超過(guò)放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)的水平,，因試劑穩(wěn)定無(wú)放射性污染且分析形式日趨多樣化,，簡(jiǎn)易靈活，臨床應(yīng)用廣泛而倍受重視,。
一,、酶免疫分析的技術(shù)進(jìn)步
近年來(lái)，EIA技術(shù)取得了顯著的發(fā)展,，主要表現(xiàn)在以下方面：
1,、 繼單克隆抗體后的第三代抗體基因工程抗體的應(yīng)用，明顯地提高了檢測(cè)的特異性,，基本消除了抗原、抗體間的非特異性交叉反應(yīng),，保證了分析的準(zhǔn)確性,。抗體制備技術(shù)的進(jìn)步,，使試劑的生產(chǎn)制備得以規(guī)?；瑱z測(cè)范圍日益擴(kuò)展,，小分子抗原,、半抗原的檢測(cè)成為事實(shí)。
2,、 分析方式的改進(jìn)與多樣化提高了試驗(yàn)的敏感性,。
（1） 除早期的競(jìng)爭(zhēng)法，間接法外,，又發(fā)展了雙抗原夾心法測(cè)抗體,，偶聯(lián)酶標(biāo)記法測(cè)抗原，橋聯(lián)酶免疫分析,，酶放大免疫分析技術(shù)等,，后者應(yīng)用了生物素-親和素系統(tǒng)，底物循環(huán)放大系統(tǒng),，酶-抗酶放大系統(tǒng)及酶偶聯(lián)放大系統(tǒng)等,。
（2）由于酶標(biāo)記技術(shù)的進(jìn)步，標(biāo)記酶的應(yīng)用已從過(guò)氧化物酶,，擴(kuò)展到堿性磷酸酶,，β半乳糖苷酶,，尿素酶，葡萄糖6磷酸脫氫酶,，葡萄糖氧化酶,，蘋(píng)果酸脫氫酶，至今有二十多種酶被應(yīng)用于EIA ,，但應(yīng)用最多的仍然是辣根過(guò)氧化物酶（Horseradish Peroxidase,HRP）和堿性磷酸酶（Alkalinephasphotase,，ALP）。
（3） 酶免疫分析與其它標(biāo)記免疫分析相結(jié)合如與熒光免疫分析（Fluorescence Immunoassay ,FIA）結(jié)合形成熒光酶免疫分析（Fluorescence Enzyme Immunoassay ,，F(xiàn)EIA）,，酶促放大時(shí)間分辨熒光免疫分析（Enzyme-am-plified time-resolved fluoroimmunoassay ，EATRFIA）,，EIA與化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence immunoassay,，CLIA）結(jié)合形成酶—化學(xué)發(fā)光免疫分析，增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（ECLEIA）,。EIA與聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)合形成的PCR-EIA分析等,。
（4）改進(jìn)固相載體的技術(shù)
傳統(tǒng)ELISA應(yīng)用的固相載體是聚苯乙稀微孔板，聚苯乙烯珠或條,，后發(fā)展為硝酸纖維素膜,、活化濾紙、硅片,、尼龍,、利用高分子材料合成的各種固相微粒等。為提高固相表面的結(jié)合容量,，增加結(jié)合物的范圍而改造聚苯乙烯的表面,，如用化學(xué)偶聯(lián)法導(dǎo)入功能性醛基、?；?、烷胺基等以更好地與蛋白質(zhì)，多肽的羧基結(jié)合,，用位點(diǎn)導(dǎo)向性共價(jià)偶聯(lián)法引入親和素,，蛋白A，多聚賴氨酸等,，以牢固地捕獲蛋白或多肽,，超平整聚苯乙烯表面的制備，克服了表面粗糙帶來(lái)的不均一性,，達(dá)到平均粗糙度只有2A+的超平整平面,，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蛋白的結(jié)合容量大，脫附率低,，孔間均一性好,，使試驗(yàn)精密度達(dá)5%,。
應(yīng)用于雙抗體夾心法時(shí)，聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,，可以增加其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能,。近年美國(guó)Corning公司研制成功表面經(jīng)琥珀酰亞胺酯活化酶標(biāo)板，其質(zhì)量達(dá)到氨基活化相似水平,。
（5）分析方法的創(chuàng)新 如同步ELISA法測(cè)定多種抗體是將抗原包被在與微孔相匹配的釘板的釘子上,，蓋上釘板的同時(shí)與微孔內(nèi)的所需標(biāo)本、試劑反應(yīng),，是又一種改良ELISA,。利用抗體和抗抗體能形成多層復(fù)合物的特性，將常規(guī)二步溫育法改為一步溫育測(cè)定法,，使檢測(cè)時(shí)間大為縮短,，現(xiàn)在已廣為應(yīng)用。