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ELISA常用的幾個方法優(yōu)缺點你都知道嗎?
閱讀：2450 發(fā)布時間：2021-3-2ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白,、抗體,、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗的標準程序,，通常是把蛋白,、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（capture Ab）固定在固相載體上,，再加入一級檢測抗體（primarydetection Ab）,，形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶（enzyme）標記了,，即可用來直接測定抗原的量,，若無，則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量,。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)（substrate）,，作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系，依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度,。
1.直接法（direct ELISA）
將抗原直接固定在固相載體上,，加入酶標記的一級抗體，即可測定抗原總量,，此一級抗體的特異性非常重要,。
優(yōu)勢：操作手續(xù)簡短，因無須使用二抗可避免交互反應(yīng),。
缺點：試驗中的一抗都得用酶標記，但不是每種抗體都適合做標記,，費用相對提高,。
2.間接法（indirect ELISA）
此測定方法與直接法類似，差別在于一級抗體沒有酶標記,，改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量,。
優(yōu)勢：二抗可以加強信號，而且有多種選擇能做不同的測定分析,。不加酶標記的一級抗體則能保留它多的免疫反應(yīng)性,。
缺點：交互反應(yīng)發(fā)生的機率較高。
3.雙抗體夾心法（sandwich ELISA）
被檢測的抗原包被在兩個抗體之間，其中一個抗體將抗原固定于固相載體上,，即捕捉抗體,。另一個則是檢測抗體，此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量,；或不標記,，再透過酶標記的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取,，才可避免交互反應(yīng)或競爭相同的抗原結(jié)合部位,。
優(yōu)勢：高靈敏、高專一性,，抗原無須事先純化,。
缺點：抗原一定得擁有兩個以上的抗體結(jié)合部位。
4.競爭法（competitive ELISA）
樣本里的抗原（自由抗原）和純化并固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一起競爭相同的抗體,，當樣品里的自由抗原越多,，就可以結(jié)合越多的抗體，而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體,，反之亦然,。經(jīng)清洗步驟，洗去自由抗原和抗體的復(fù)合物,，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,，拿來與只有固定抗原的對照組結(jié)果相比較，根據(jù)呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量,。
優(yōu)勢：可適用比較不純的樣本,，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺點：整體的敏感性和專一性都較差,。
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