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上海恒遠為您解析如何確定ELISA抗原和抗體的稀釋倍數(shù)
閱讀：3792 發(fā)布時間：2021-2-1在運用ELISA方法測定抗體方面,，通常所用的方法稱為間接法,，也是目前常用的方法，其原理：間接法首先用抗原包被于固相載體,，這些包被的抗原必須是可溶性的,，或者至少是極微小的顆粒，經(jīng)洗滌,，加入含有被測抗體之標本,，再經(jīng)孵育洗滌后，加入酶標記抗抗體,，(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG,、IgM),，再經(jīng)孵育洗滌后,，加底物顯色,底物降解的量，即為欲測抗體的量,，其結果可用目測或用分光光度計定量測定,。
操作步驟：
1.將抗原按5 μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)，100 μl /孔,，4℃過夜,。
2.次日PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘),。
3.加2％BSA封閉室溫1 h,，200 μl /孔。
4.陽性對照從10ug/ml,，做倍必稀釋,，待測血清從1：50做倍比稀釋，預試驗后確定稀釋倍數(shù)及陽性對照的起始濃度及稀釋數(shù)量（以可以做標準曲線為參數(shù)）,，室溫1h,。
5.PBS－T清洗4次(快1慢3,，間隔5分鐘)。
6.加入1：3000（不同公司有不同的推薦稀釋度） PBS－T稀釋的HRP標記的山羊抗人IgG,，100 μl /孔,，室溫1h。
7.PBS－T清洗4次(快1慢3,，間隔5分鐘),。
8.顯色，100 μl /孔,，顏色變深后中止顯色,，2M硫酸在BIO－RAD酶標儀上讀數(shù)，可用ABTS,，OPD,，TMB等
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