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細胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細胞內信號轉導，細胞免疫熒光技術是利用免疫技術和熒光標記技術相結合,，原理就是利用抗原-抗體反應之后,，采用熒光標記，標記完成后,，顯微鏡下觀察細胞內某種抗原成分的多少,，從而做出一個定位研究，也可以為細胞內信號傳導提供一個明確的指導,，細胞免疫熒光具有敏感性強,、特異性高、速度快的特點,，是目前比較常用的組織學技術,，也是比較準確的,。

一、實驗方法原理
在進行細胞免疫熒光過程中,，需要用到細胞爬片，通過將爬片浸在細胞培養(yǎng)基內,，細胞在爬片上生長,，進而進行細胞的免疫熒光。
 

二,、實驗材料
1.細胞樣品
2.試劑,、試劑盒：多聚甲醛 70%甲醇 丙酮 PBS Triton  BSA DAPI染液 DABCO Tris 甘油
3.儀器、耗材：玻片

三,、細胞爬片免疫熒光實驗步驟
第yi天：
1. 在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次,，每次3min；
2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min,， PBS浸洗玻片3次,，每次3min；
3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室溫通透20min（細胞膜上表達的抗原省略此步驟）,；
4. PBS浸洗玻片3次,，每次3 min，吸水紙吸干PBS,，在玻片上滴加正常山羊血清,，室溫封閉30min；
5. 吸水紙吸掉封閉液,，不洗,，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜,；
第二天：
6. 加熒光二抗： PBST 浸洗爬片3次,，每次3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好的熒光二抗,，濕盒中20-37℃孵育1h,，PBST浸洗切片3次，每次3min,；注意：從加熒光二抗起,，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。
7. 復染核：滴加DAPI避光孵育5min,，對標本進行染核,，PBST 5minx4次洗去多余的DAPI；8. 用吸水紙吸干爬片上的液體,，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片,，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像,。

注意事項
1.取細胞爬片時，動作應輕柔,，防止將細胞爬片夾碎,，影響實驗進程。
2.種細胞過程中,，要注意將細胞輕柔混勻,，“八”字或者“十”字形搖晃，防止細胞局部生長過密,。