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如何使用ELISA試劑盒進(jìn)行定量和定性試驗(yàn)
閱讀：3872 發(fā)布時(shí)間：2020-3-23ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì),，具體的方法步驟可有多種,。即用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。
一、ELISA試劑盒定量測試
ELSIA操作步驟復(fù)雜,，影響反應(yīng)因素較多,，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致，因此在定量測定中,，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,，曲線吸光度可接近2.0,，繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接,，所得曲線一般呈S形,，其頭、尾部曲線趨于平坦,，中央較呈直線的部分是理想的檢測區(qū)域,。
二、ELISA試劑盒定性測試
定性測定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測抗原或抗體作出"有"或"無"的簡單回答,，分別用"陽性",、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測定系統(tǒng)中有反應(yīng),。"陰性"則為無反應(yīng),。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度,，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn),。在這種半定量測定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),，呈陽性反應(yīng)的稀釋度即為滴度,。根據(jù)滴度的高低,，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性,、弱陽性更具定量意義,。