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ELISA試劑盒包被抗原的選擇
閱讀：2653 發(fā)布時(shí)間：2019-10-24 ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化：
在這一過(guò)程中,，一般情況下有三次加樣,，它們分別是加標(biāo)本,，加酶聯(lián)絡(luò)物，加底物,。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,，由于分子量太小，一般難于直接吸附在酶標(biāo)板上,，一般都先使其與無(wú)關(guān)蛋白質(zhì),，比如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上,。凍住血清融解后,，蛋白質(zhì)有些濃縮，散布不均,，應(yīng)充沛混勻宜輕緩,，防止氣泡，可上下倒置混和,，不要在混勻器上劇烈振蕩,。也可在板孔中參與稀釋液,，再在其參與血清標(biāo)本，然后在微型轟動(dòng)器上轟動(dòng)1分鐘以確?；旌?。一般說(shuō)來(lái)，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,，逾越一星期測(cè)定的需低溫冰存,。
ELISA試劑盒抗原包被選擇：
獸藥殘留檢測(cè)大部分藥物因分子量小，難于直接吸附于固相載體上,，因此需要將小分子藥物經(jīng)過(guò)改造成合適的半抗原,，再將半抗原與大分子的載體蛋白偶聯(lián)（通常是利用半抗原分子中含有一定數(shù)量的游離基團(tuán)，如巰基,、氨基,、醛基、羧基,、酮基,、苯酚基、咪唑基等,，這些基團(tuán)可與蛋白質(zhì)分了中的對(duì)應(yīng)基團(tuán)在偶聯(lián)劑的作用下發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)）,，從而形成半抗原-載體蛋白復(fù)合物，半抗原-載體蛋白復(fù)合物通過(guò)載體蛋白吸附到固相載體上,，實(shí)現(xiàn)小分子藥物的包被過(guò)程,。常用的載體蛋白有： 牛血清白蛋白(BSA) 、人血清白蛋白（HSA）,、牛的免疫球蛋白（TRP）,、雞的卵清蛋（OVA）、血藍(lán)蛋白（KLH）等,。
ELISA試劑盒包被條件的優(yōu)化：
包被液的選擇：一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,，假設(shè)包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液,。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,，而血清標(biāo)本只需待血清天然凝結(jié)、縮短后即可取得,。
包被濃度的選擇：包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改變,，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml，要明晰關(guān)于特定包被抗原的zui適包被濃度需求經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)判定,。
包被溫度的選擇：一般是4-8度條件下放置一個(gè)黑夜或許37度保溫2小時(shí),，我們劇烈主張4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的堅(jiān)持。