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ELISA試劑盒實驗吸光度值發(fā)生衰減改怎么辦？
閱讀：2044 發(fā)布時間：2019-7-10 根據(jù)比爾定律, 吸光度與試樣濃度成正比, 在不同的吸光度( Absorbance,Abs) 范圍內(nèi)測量, 可引起不同的誤差.分析工作者應予高度重視.分析樣品濃度太低或濃度太高, 吸光度值超越了合適的范圍, 都不會得到滿意的結(jié)果.應使被分析樣品的吸光度范圍控制在一個合理的范圍內(nèi).
試樣濃度不能太低, 吸光度不能太小, 信號過小, 光度噪聲的影響較大,使儀器的信噪比下降, 被測試的試樣濃度下限增高和分析誤差增大, 如測試huang曲霉素, 因儀器的噪聲太大, 測試數(shù)據(jù)從0. 4Ab s 開始就超過1%的相對誤差.
西北大學的高老師在操作ELISA試劑盒實驗的時候發(fā)現(xiàn)了一個問題,，于是來電向恒遠生物銷售人員吳咨詢：加完顯色液(購買)顯色一定時間后，再加終止液（2M H2SO4,，自己配制）后,，立即測試其吸光度值，等過幾分鐘再測試吸光度值,，發(fā)現(xiàn)兩次測得的吸光度值發(fā)生衰減,。第二次均小于次。
并且,，加終止液時,，從*條加到第12條后，測試發(fā)現(xiàn),，吸光度值從1-12條逐級衰減,。前提是這12條酶標板都是同一種產(chǎn)品，并且包被相同蛋白,。
高老師向吳詳細的說明了實驗中出現(xiàn)的情況,，吳對實驗的問題有了一定的了解，隨后安排技術(shù)人員為高老師溝通,，為其解決這一問題,，高老師恍悟道：原來ELISA吸光度值衰減這樣處理就可以啦。
其實具體的原因也很簡單,，有可能是顯色液的質(zhì)量不夠好。一般情況下,，終止反應后OD值的下降前期不是很明顯,。終止后，吸光度值是會隨著時間衰減,，所以一般是加完終止液后立即測,，這樣比較準。
再次分析12條顯示逐級遞減的原因看看是否是：
① 顯色時間調(diào)整,，如果您現(xiàn)在的顯色時間是10MIN,，那調(diào)整到30MIN，再加終止液,觀察上述現(xiàn)象是否出現(xiàn),。
② 終止液中加入少量甘油看下怎么樣,。
ELISA試劑盒顯色時間是30分鐘，終止后要求在30分鐘內(nèi)檢測,，加入終止液后,，在加入終止液后2到3分終內(nèi)檢測，這是OD值相對比較高,。擬合值能達到四個9,。
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