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小鼠免疫球蛋白試劑盒檢測原理:
小鼠免疫球蛋白試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被對(duì)稱性免疫球蛋白A(IgA)抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的對(duì)稱性免疫球蛋白A(IgA)試劑盒呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值）,，計(jì)算樣品濃度,。

小鼠免疫球蛋白試劑盒樣品收集、處理及保存方法:
1,、血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2、血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
3,、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,。
4,、取上清液保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測,。

小鼠免疫球蛋白試劑盒操作:
小鼠免疫球蛋白試劑盒使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。
標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí)。甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。在450nm波長處測定各孔的OD值。局限6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果,。

小鼠免疫球蛋白試劑盒：
1、靈敏度：小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為1.0 nmol/L。
2,、特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng),。
3、重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

文章關(guān)鍵詞：小鼠免疫球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒,試劑盒操作方法,操作注意事項(xiàng)