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一起了解:酶聯(lián)免疫DIY夾心法實驗技術指南
閱讀：2233 發(fā)布時間：2018-12-26在各位朋友們的支持下，上海恒遠生物公司發(fā)展越來越好！在員 工們的努力下,，公司產(chǎn)品與服務愈加！無論是2018還是2025,，我 們都會一如既往的為您提供高質(zhì)量產(chǎn)品與完善的服務,，并積極優(yōu)化不 足之處。今天是本周的第三個工作日,，我公司為您帶來的資訊內(nèi)容是酶聯(lián)免疫DIY夾心法實驗技術指南,，一起來了解下。
酶聯(lián)免疫吸附劑測定實驗基本原理：
1.使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,，并保持其免疫活性,。
2.使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原 或抗體既保留其免疫活性,，又保留酶的活性,。
3.在測定時，把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或 抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應,。用洗滌的方 法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質(zhì)分開,，后結(jié)合在 固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。
4.加入酶反應的底物后,，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,，產(chǎn)物的量 與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關,，故可根據(jù)顏色反應的深淺刊物定性 或定量分析。
由于酶的催化頻率很高,，故可極大地地放大反應效果,，從而使測 定方法達到很高的敏感度。
酶聯(lián)免疫DIY夾心法實驗技術指南：
1.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對,；若選擇兩個單 抗,，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對,。
2.為了確定*信號和低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗 體(0.25-2μg/ml)在預實驗中進行彼此相抗的滴定,。同時，應包括在 適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋,。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行 操作,。
3.標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的 細節(jié),。在使用細胞因子前,，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的 細胞因子,。根據(jù)每批說明書中的細節(jié),，將凍干的細胞因子復溶。
4.一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列 稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml,?？衫脴藴实腅LISA操作流程、放大試 劑盒,、第三類試劑,、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
5.為了優(yōu)化靈敏度,，建議過夜孵育標準品和標本,。
6.若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮 鈉,，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性,。
7.當測定混合液體中的抗原時，如血清,，建議在標本稀釋液中加不相 干的Ig.
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