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熱愛ELISA實驗的新手們需注意這些細節(jié)
閱讀：1695 發(fā)布時間：2018-11-28 今天,，我公司技術(shù)專員特意為大家準備十幾條ELISA操作的重點細節(jié),，閱讀之后可以總結(jié)一下您在實驗中有哪些重點被忽略掉了。熱愛ELISA實驗的新手們需注意這些細節(jié)：
1.不管是試劑盒,，還是其它產(chǎn)品,，在使用之前我們都要仔細閱讀說明書。
2.同樣的,，一定要確定試劑盒是不是在有效期內(nèi),。
3.按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積),。
4.標本制備要規(guī)范,，每份標本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(貯存)，盡量分裝做備份,。短期內(nèi)無法實驗者,，注意低溫保存。
5.ELISA實驗中為了確定*信號和低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進行彼此相抗的滴定,。同時,，應(yīng)包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作,。
6.標準品的配制：對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書,，注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前,，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子,。根據(jù)每批說明書中的細節(jié),，將凍干的細胞因子復(fù)溶,。
7.一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml?？衫脴藴实膃lisa操作流程,、放大試劑盒、第三類試劑,、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度,。
8.根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量。
9.按說明書將所用試劑平衡至室溫,，配制所需試劑,，DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南。
10.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對,；若選擇兩個單抗,，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對,。
11.為了優(yōu)化靈敏度,，建議過夜孵育標準品和標本。
12.若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),，應(yīng)嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
13.當測定混合液體中的抗原時,，如血清,，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
14.準備好所有實驗額外所需物品,，如試管,、吸頭、移液器,、離心機等,。
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