化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
知道什么是酶聯(lián)免疫試劑盒嗎?
閱讀：2293 發(fā)布時間：2018-1-24 酶聯(lián)免疫試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理，能測量人促卵泡素（FSH）,，只能用于研究用途,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
酶聯(lián)免疫試劑盒工作原理
促卵泡素（FSH）是動物腦垂體分泌作用于卵巢卵泡生長,、發(fā)育,、分化、成熟和排卵的重要繁殖激素.由于是生物大分子,不能透過細(xì)胞膜,FSH必須與靶細(xì)胞膜上的促卵泡素受體（FSHR）結(jié)合,經(jīng)過受體介導(dǎo)將信息傳遞到靶細(xì)胞內(nèi),才能發(fā)揮其生物學(xué)功能.所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）,。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體,。檢測相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)生物素（biotin）標(biāo)記,。樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng),；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān),。
酶聯(lián)免疫試劑盒工作環(huán)境
1． 37℃恒溫箱。
2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀,。
3． 自動洗板機,。
4． 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
5． 蒸餾水,，容量瓶等
6． 干凈的試管和Eppendof管
酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟
1． 確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,。
2． 將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照,。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入,。
3． 酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)90分鐘,。
4． 反應(yīng)后用自動洗板機吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下,。洗滌2次,。
5． 將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入,。37℃反應(yīng)60分鐘。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,，每次浸泡1分鐘左右,。
7． 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘,。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,，每次浸泡1-2分鐘左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,，37℃避光反應(yīng),，反應(yīng)過程中，要經(jīng)常的觀察,，當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有 明顯的梯度藍(lán)色,，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔,。（顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘）,。
10． 用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。
11． 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度,。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應(yīng)該×N,。