化工儀器網
技術文章
人CD147 ELISA試劑盒實驗原理與操作步驟
閱讀：2235 發(fā)布時間：2011-3-15人CD147 ELISA試劑盒實驗原理與操作步驟
實驗原理
人CD147 ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人CD147水平,。用純化的人CD147抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入CD147,，再與HRP標記的CD147抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的CD147呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人CD147濃度,。
公司主營產品：ELISA試劑盒,，Omega試劑盒，放免試劑盒,，ATCC細胞,，血清，抗體,，生物科研試劑,、實驗耗材等
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
| 20μg/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 10μg/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 5μg/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 2.5μg/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 1.25μg/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11. 測定：以空白空調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。