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金秋九月,分享ELISA試劑盒實驗的操作要點
閱讀：1884 發(fā)布時間：2017-9-22 ELISA試劑盒應嚴格遵照規(guī)定操作,，必能得出準確的結(jié)果,。首先應選取的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件,。所以ELISA試劑盒的購買,，試劑質(zhì)量的保證以及實驗前實驗儀器的檢察都是很重要的。
一,、標本的采集及保存
1,、血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融,。
2、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。
3,、細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應避免反復凍融。
4,、樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍,。
注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存,，-20℃不應超過1個月,，-80℃不應超過2個月；標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。
二、試劑的準備
按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑. ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液應用pH計測量較正.從冰箱中取出的試 驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用.試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存,。
三,、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
四,、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
五,、洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
六,、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
七、測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
講述完了以上ELISA實驗的操作要點,，可以發(fā)現(xiàn)其實很多步驟都并不復雜,，重要的是操作的時候一定要注重細節(jié)，熟能生巧,，才可以掌握ELISA實驗的精髓所在,。