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怎樣完善ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的過(guò)失,？
閱讀：1304 發(fā)布時(shí)間：2017-6-28 ELISA操作步驟多，新手操作難免會(huì)有過(guò)失,。而這些過(guò)失很多是由細(xì)節(jié)不夠好造成的,，減少過(guò)失的方法有很多，比如做實(shí)驗(yàn)時(shí)少說(shuō)話,，防止唾液掉進(jìn)酶標(biāo)條中,。當(dāng)然，大家還要學(xué)會(huì)自己發(fā)掘問(wèn)題,，找出原因。那么我們要怎樣完善ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的過(guò)失,？
①：評(píng)估試劑的實(shí)用性,，試劑的穩(wěn)定與否，對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要,。在試劑啟用前,，應(yīng)進(jìn)行陰、陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),，判定試劑符合要求后方可使用,。
②：操作前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規(guī)范化操作,。不同批號(hào)的試劑不可混用,。值得改進(jìn)的地方,，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)，比如洗板次數(shù)的掌握等,。
③：加樣要準(zhǔn)確,、快速。加樣不準(zhǔn)確,，酶物的量不能確定,，直接影響顯色結(jié)果。另外,，顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),，如果加樣遲緩,，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露在外,，尤其室溫過(guò)高時(shí),，保存期會(huì)縮短甚至失效。
④：檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn),。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器,、器械，具有一定總結(jié)和分析問(wèn)題的能力,，對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決,。
⑤：使用校對(duì)過(guò)的微量移液器，排除自然誤差,。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要,。
⑥：嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間，顯色時(shí)間過(guò)短,，加入終止液反應(yīng)終止后,，底物結(jié)合物的量過(guò)少，易出現(xiàn)假陰性,。超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色,，應(yīng)判為假陽(yáng)性，這可能與試劑本身有關(guān),。加顯色劑后立即顯色,，不可報(bào)陽(yáng)性，這可能是本底顯色的結(jié)果,。
⑦：洗滌*,，洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性。另外,，洗滌液要新鮮,，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,，也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性,。
⑧：嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),，酶失活,；反應(yīng)時(shí)間過(guò)短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,，物結(jié)構(gòu)松散不牢固,，容易洗掉，都可能造成假陰性,。
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