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你未必知道的32條ELISA實(shí)驗(yàn)秘訣
閱讀：1701 發(fā)布時(shí)間：2017-4-19
只有不斷學(xué)習(xí)與實(shí)驗(yàn)才能逐漸積累經(jīng)驗(yàn)，做出更好的實(shí)驗(yàn)效果,。在前面的資訊內(nèi)容及技術(shù)文章中,，上海恒遠(yuǎn)為大家分享許多ELISA試劑盒的操作技巧、要求,、方法等相關(guān)技術(shù),，我公司技術(shù)員根據(jù)自身多年【ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)】經(jīng)驗(yàn)，整理出的ELISA操作技巧,。下面我們一起來(lái)看下具體內(nèi)容,，你未必知道的32條ELISA實(shí)驗(yàn)秘訣：
1.加樣后及時(shí)放人孵箱，標(biāo)本較多時(shí),，要分批操作,。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*。
2.顯色劑盡量在臨用前配制,，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。
3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干,。
4.合理安排檢測(cè)量,，以免反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
5.液體全部加入酶標(biāo)孔后,，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s,，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng),。
6.洗液不夠時(shí),，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液,，加入0.1%的吐溫20作為洗液,。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
7.吸取液體時(shí),，要用量程和需要量接近的槍去吸,，減少誤差。
8.要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,，又能反映出試劑盒的精密度,。
9.為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,。
10.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存,。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。
11.作時(shí)必須戴手套,，穿工作衣,，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。
12.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
13.樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
14.剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄,。
15.不同批號(hào)試劑組分不得混用。
16.ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈,。
17.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
18.用戶(hù)在初次使用試劑盒時(shí),，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,，以便試劑集中到管底。
19.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,，該孔不加任何試劑,，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零,。
20.要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性,，可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為20%左右時(shí),，lmL的水可以看作是lg,、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進(jìn)行確定。
21.在使用微量加樣器時(shí),，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
22.吸取液體時(shí)速度不易太快,，以免產(chǎn)生氣泡,，吸取的量不夠準(zhǔn)確,。
23.將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,，可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸,，液滴會(huì)自然流下去。吸入液體時(shí)的的方法是吸兩檔打一檔,，防止由于槍頭的毛細(xì)作用使得部分液體不能流出而造成的誤差,。
24.吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差,。
25.實(shí)驗(yàn)前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出,，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標(biāo)板只要取出所需量,。
26.由于底物顯色劑對(duì)光及其敏感，因此要避光保存,。
27.手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后,。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,，防止交叉污染,。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
28.檢測(cè)吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開(kāi),，將其預(yù)熱30min以上,。
29.底物為T(mén)MB，避免與皮膚相接觸,。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
30.孵育的時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)上的時(shí)間為準(zhǔn),。
31.對(duì)樣本的結(jié)果有疑問(wèn)時(shí)需要使用其他檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證,。
32.沒(méi)有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液,，切勿使用自來(lái)水,。
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