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液相色譜儀色譜柱選購(gòu)指南
現(xiàn)代液相色譜儀色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇,。但是色譜填料的選擇范圍很寬,，要做合適的選擇，必須對(duì)此有一定的認(rèn)識(shí)和了解,。
一,、硅膠基質(zhì)填料
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團(tuán),，如胺基團(tuán)(NH2,，APS)和氰基團(tuán)(CN，CPS)的鍵合相填料,。
由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其它極性基團(tuán)極性較強(qiáng),，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小,，即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱,。
正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如：正己烷(Hexane),、氯仿(Chloroform),、二氯甲烷(Methylene Chloride)等,。
2、反相色譜
反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì),，表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相,。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水,、緩沖液與甲醇,、乙腈等的混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組份zui先被沖洗出,，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留,。
常用的反相填料有：C18(ODS)、C8(MOS),、C4(Butyl),、C6H5(Phenyl)等。
二,、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等,，其主要優(yōu)點(diǎn)是在pH值為1～14均可使用。
相對(duì)于硅膠基質(zhì)的C18填料,，這類(lèi)填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物填料對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效,。
現(xiàn)有的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低,。
三,、其它無(wú)機(jī)填料
其它HPLC的無(wú)機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì),，一般于特殊的用途,。如，石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料,。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性,。
該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng),。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，又由于在HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解,，這類(lèi)柱可在任何pH與溫度下使用,。
氧化鋁也可用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強(qiáng),，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,，其優(yōu)點(diǎn)是可在pH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用。
但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定的限制,，所以未能廣泛應(yīng)用,。新型氧化鋯基質(zhì)色譜填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,，應(yīng)用pH范圍1～14,，溫度可達(dá)100℃,。
由于氧化鋯填料是zui近幾年才開(kāi)始研究,，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢(shì)尚在進(jìn)行中,。