1 適用范圍
本標準適用于氨基酸分析儀測定谷物籽粒中氨基酸含量的樣品前處理。 2 方法原理
谷物籽粒中的氨基酸,，系按一定順序結合成不同類型的肽和蛋白質,，因而在測定前
要用一定濃度的酸使蛋白質中肽鍵斷裂，水解成多種氨基酸后,，用氨基酸分析儀測定,。
由于色氨酸在酸性溶液中水解時易被破壞，須用堿水解,。 3 儀器設備
3.1 分析天平：感量 0.0001g,。
3.2 實驗室用粉碎機。
3.3 噴燈,。
3.4 真空泵,。
3.5 真空規(guī)。
3.6 恒溫干燥箱,。
3.7 水解管：用九五料玻璃制的球形管或圓底試管。體積 15-20ml,。
3.8 聚四氟乙烯管:φ10×100mm,。
3.9 玻璃試管：φ15×180mm。
3.10 濃縮器（可控溫,，減壓）或真空干燥器,。
3.11 容量瓶：25ml。 4 試劑
除注明者外均為分析純,。配制試劑均用去離子水,，電導率大于 1m,-1。
4.1 6mol/L鹽酸：鹽酸（GB622—77）,，優(yōu)級純,，與水按 1.1混合。
4.2 4mol/L氫氧化鋰：用水溶解168.8g氫氧化鋰（Q/HG12—325—83）,，稀釋至1000ml,。
4.3 pH2.2緩沖液：19.6g檸檬酸三鈉（HG3—1298—80）用水溶解后，加入 16.5ml鹽
酸（GB622—77,，優(yōu)級純）,，5ml25%硫代雙乙醇，1g苯酚（HG3—1165—78）,，zui后定
容至 1000ml,。
4.4 pH4.3緩沖液：14 71g檸檬酸三鈉（ HG 3—1298—80）和2.92g氯化鈉（GB1266—77）,，
10.50g檸檬酸（HG3—1108—81），溶解在 500ml水中,，再加入 5ml25%硫
代雙乙醇,，0.1ml辛酸，zui后定容至 1000ml,。
4.5 冷凍劑：液氮或干冰加丙酮（或加乙醇）,。 5 試樣制備
5.1 取有代表性的樣品，用四分法分取 25g左右,，揀去雜質,，帶殼籽粒進行脫殼。
5.2 將樣品放在60-65 恒溫干燥箱中,。干燥 8h左右冷卻后在粉碎機中碾碎,，全部通
過孔徑為 0.25mm的篩子，充分混勻后裝入磨口瓶中備用,。 6 處理方法
6.1 酸水解步驟
6.1.1 稱樣
稱取樣品 30.5mg,，準確至 0.1mg，置于水解管中,，同時另稱樣品按 GB3523—83
《谷類,、油料作物種子水分測定法》，測定水分含量,。
6.1.2 水解
6.1.2.1 在水解管內加入 6mol/L鹽酸 10ml,，在距管口 2cm左右處，用噴燈灼燒并拉一
*,。再將管子放入冷凍劑中,，冷卻至溶液呈固體后取出，接在真空泵的抽氣管上,，使
減壓至 7Pa（≤5×10.2mmHg）后封口,。
6.1.2.2 將封好口的水解管放在 110±01℃ 的恒溫干燥箱內，水解 22-24h后,，取出冷
卻,。
6.1.2.3 打開水解管，將水解液定量轉移到 25ml容量瓶內,，定容過濾,，吸取濾液 1ml，
用旋轉濃縮器（45-50℃）或置于真空干燥器內真空干燥,，殘留物用 1-2ml去離子水
溶解蒸干,，如此反復進行 1-2次，zui后一次蒸干后,，加 pH2.2緩沖液溶解,，供儀器測
定,。
6.2 堿水解步驟
6.2.1 稱樣
稱取樣品 60±5mg準確至 0.1mg，置于聚四氟乙烯管內,，同時按 GB3523—83測定
水分,。
6.2.2 水解
6.2.2.1 在聚四氟乙烯管內加入 4mol/L氫氧化鋰 1ml，使樣品均勻濕潤,，然后把管子
放入玻璃試管中,，在玻璃管上端，離聚四氟乙烯管 4-5cm處,，用噴燈灼燒并拉一*,，
再放到冷凍劑中，冷卻至溶液呈固體后取出,，接在真空泵的抽氣管上,，減壓至 7Pa（≤
5.10-2mmHg）后封口。
6.2.2.2 把管子放在 110±1℃ 的恒溫干燥箱內水解 20h,，取出冷卻,，將水解液定量轉移
到 25ml容量瓶內，用 6mol/L鹽酸中和后,，再用 pH4.3的緩沖液定容,，過濾后供測定色
氨酸用。 附 錄 A
氨基酸分析儀測定的結果計算
（補充件）
A.1 計算公式
A
某種氨基酸,，%（干基） =---------×10的負6次方×25×100
m（1-H）
式中： A——測得的某種氨基酸在每毫升水解液中的含量,，mg；
m——樣品的質量,，mg；
H——樣品的水分百分率,；
25——稀釋倍數(shù),。
A.2 結果表示
兩個平行樣品的測定結果用算術平均值表示，保留小數(shù)點后有效數(shù)字兩位,。
A.3 結果的允許差
兩個平行測定值相對差不得大于 8%,。 |
