色譜柱注意事項
        色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效,、縮短使用壽命甚至損壞,。在色譜操作過程中，需要注意下列問題,，以維護色譜柱。
①　避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動,。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況,；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行,，在閥進樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）,。
②　應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中,，不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?br />③　一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時,，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì),。否則反沖會迅速降低柱效。
④　選擇使用適宜的流動相（尤其是pH）,，以避免固定相被破壞,。有時可以在進樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時,，預(yù)柱為硅膠,，可使流動相在進入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解,。
⑤　避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),，需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是填有相似固定相的短柱,。保護柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換,。
⑥　經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì),。在進行清洗時,，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml,。
下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,，作為參考：硅膠柱以正已烷（或庚烷）、二氯甲烷和甲醇依次沖洗,，然后再以相反順序依次沖洗,，所有溶劑都必須嚴格脫水。甲醇能洗去殘留的強極性雜質(zhì),，已烷使硅膠表面重新活化,。反相柱以水、甲醇,、乙腈,、一氯甲烷（或氯仿）依次沖洗，再以相反順序依次沖洗,。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液,，那么可以省略zui后用水沖洗這一步。一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質(zhì),，在甲醇（乙腈）沖洗時重復(fù)注射100~200µl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強疏水性雜質(zhì),。四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數(shù)次,。此外,，用乙腈、丙酮和三氟醋酸（0.1%）梯度洗脫能除去蛋白質(zhì)污染,。
陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽,，然后用水,、甲醇、二氯甲烷（除去吸附在固定相表面的有機物）,、甲醇,、水依次沖洗。
⑦　保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,，柱接頭要擰緊,，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間,。
⑧　色譜柱使用過程中,，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M行清洗,；另一種可能是大分子進入柱內(nèi),，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形,，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,，死體積增大。
在后兩種情況發(fā)生時,，小心擰開柱接頭,，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度（注意把被污染填料取凈）再把柱內(nèi)填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相（與柱內(nèi)相同）填滿色譜柱,，壓平,，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善,，但是很難恢復(fù)到新柱的水平,。
柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱（5~30mm）,，可以起到保護,、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效,，這是值得的。
通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上,。以硅膠為基質(zhì)的填料,，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后,，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂,，特別是一些有色物質(zhì)更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙稀Ｐ碌纳V柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,，使柱效下降,，這時也可補加填料使柱效恢復(fù)。
每次工作完后,，用洗脫能力強的洗脫液沖洗,，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動相時,，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗,。含鹵族元素（氟、氯,、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道,，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用,，應(yīng)每隔4~5天開機沖洗15分鐘,。