色譜雙峰指的是明明是同一種物質(zhì),，但在色譜圖中卻呈現(xiàn)雙峰,，讓實(shí)驗(yàn)人員誤認(rèn)為含有兩種物質(zhì),。那么，出現(xiàn)雙峰的原因主要有哪些呢,？今天小編就和大家聊一聊，液相色譜出現(xiàn)“雙峰"的原因,。

在HPLC分析中，在色譜柱正常,，樣品濃度適宜,，分析方法合適，色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下,，峰型應(yīng)對(duì)稱而尖銳,。但在實(shí)際操作中，如果對(duì)樣品不了解,，前處理不恰當(dāng)或者分析方法不合理等,，會(huì)出現(xiàn)峰形不正常的情況，其中雙峰現(xiàn)象就是液相色譜中常見的問題之一,。

出現(xiàn)色譜雙峰的原因一般有以下幾種原因：色譜柱的問題,、溶劑、進(jìn)樣量,、樣品特性,，以及pH。

色譜柱

如果在樣品分析時(shí)發(fā)現(xiàn)每個(gè)色譜峰都有雙峰出現(xiàn),，尤其在采用單一純物質(zhì)時(shí),，則可以確定是色譜柱出現(xiàn)問題了，一般是柱頭受損或者柱頭固定相污染引起的,。

如果進(jìn)樣量少,，原來色譜柱正常，色譜峰的形狀多為一大峰帶一小峰,，不一定拖尾,，這一般應(yīng)是柱頭受堵，將色譜柱反過來接,，用流動(dòng)相沖洗或酸洗或其它溶劑,，將堵在柱頭的殘留物沖掉，再反過來,，一般情況下就行了,。當(dāng)然不反沖，正沖有時(shí)也會(huì)正常的,。如果峰拖尾,，雙峰強(qiáng)弱相差不大，柱頭固定相變臟或流失可能性更大,，這時(shí)可以將進(jìn)樣頭擰開,，將微孔濾片超聲,，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料擰緊,，不過這個(gè)對(duì)技術(shù)要求較高且不能經(jīng)常做,，否則用不了幾次，色譜柱就會(huì)應(yīng)柱效降低而報(bào)廢,。如果上述不能解決問題,，可能是柱塌陷造成的，此時(shí)需要更換色譜柱,。

溶劑問題

目前HPLC分析多為反相色譜,，流動(dòng)相多為甲醇、乙腈,、水,，加各種添加劑以改善分離性能。樣品一般用與流動(dòng)相相溶的溶劑溶解,，最佳的溶解方法是用流動(dòng)相溶解,。在實(shí)際分析中，有時(shí)候?yàn)榱藰悠返娜芙庑曰蚍€(wěn)定性加入了一點(diǎn)的緩沖液,，緩沖液的酸堿性可能會(huì)導(dǎo)致樣品轉(zhuǎn)化,，從而產(chǎn)生雙峰現(xiàn)象。此時(shí)需要更換緩沖液,，調(diào)整溶劑pH值,，或者用流動(dòng)相配置樣品。

此外,，樣品要現(xiàn)配現(xiàn)用,，避免樣品溶解液的有機(jī)相比例、pH值發(fā)生變化而導(dǎo)致的溶劑效應(yīng),。

進(jìn)樣量

當(dāng)用溶劑極性強(qiáng)度大的試劑,，如純甲醇、純乙腈,，純乙醇,，而分析體系中以水為主時(shí)，如果樣品進(jìn)樣量大,，如定量管為20ul,，此時(shí)單一的純物質(zhì)會(huì)出現(xiàn)雙峰，第二峰比第一峰小(每次都不太一樣),，且拖尾,，保留時(shí)間會(huì)提前(相對(duì)進(jìn)樣量少而言)，將進(jìn)樣量減少一半以上,，峰型將變?yōu)檎,！?/span>這是樣品的溶劑與流動(dòng)相極性相差太大,，而流動(dòng)相來不及將其稀釋達(dá)到平衡造成的，此情況下需要減少進(jìn)樣量,。

另一個(gè)原因是,，進(jìn)樣量不一定大，但絕對(duì)量很大,，色譜圖上的雙峰緊靠在一起,，基本上齊高，不拖尾(如果出峰很快,，也可能是色譜柱問題),。將樣品稀釋再進(jìn)樣就可以了,，這是由于進(jìn)樣量過大,，色譜柱過載造成的。

樣品特性

有些樣品由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn),，存在互變異構(gòu)現(xiàn)象,，而這種互變異構(gòu)體無法分開，而是以一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡存在,。在色譜分析時(shí),，在一個(gè)特定的條件下(如pH值、流動(dòng)相極性,、溫度等),，一種物質(zhì)將出現(xiàn)雙峰，雙峰靠的很近,，基本齊高,，不拖尾，條件稍一變化,，尤其pH,，雙峰現(xiàn)象將消失，如紅霉素等,。

有的樣品紫外的色譜圖上看不到雙峰,，但在LC-MS下，用質(zhì)譜檢測(cè)器,，其質(zhì)譜的總離子流圖上較明顯,，如農(nóng)藥啶蟲瞇(吡蟲清)。

pH值

體系pH值對(duì)色譜雙峰的影響出現(xiàn)在各個(gè)環(huán)節(jié)上(前面已經(jīng)提到),，尤其在緩沖液流動(dòng)相平衡過程中其影響更為明顯,。當(dāng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)，受pH的連續(xù)變化影響會(huì)經(jīng)常遇到這種雙峰的情況,。另外,，在樣品分析時(shí),，流動(dòng)相的pH盡量遠(yuǎn)離被分析物的等電點(diǎn)，否則也容易引起雙峰的產(chǎn)生,。在用離子對(duì)試劑分析時(shí),，選擇不好條件也會(huì)容易引起雙峰的產(chǎn)生。

HPLC分析中,，在色譜柱正常,，樣品靈敏度足夠，分析方法合適,，色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下（不包括梯度）,，峰型應(yīng)對(duì)稱而尖銳。但是,，在對(duì)樣品了解程度不夠,，方法不妥，樣品處理方法及進(jìn)樣方式不合理下,，會(huì)出現(xiàn)各種意想不到的問題,，而對(duì)色譜峰難以作出合理的解釋，尤其對(duì)于新手更是如此,，所以,，了解每種鬼峰出現(xiàn)的原因?qū)ξ覀兊姆治龉ぷ魇欠浅Ｖ匾摹?/span>