色譜柱在使用前,,進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品,、流動相,、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件),只有這樣,,測得的結(jié)果才有可比性,。
1,、樣品的前處理:
a,、使用流動相溶解樣品。
b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
c,、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
2,、流動相的配制:
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
a,、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中),。
b,、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外),。
c、流動相的黏度要盡量小,,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
d,、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應,。如使用UV檢測器,,使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e,、流動相沸點不要太低,,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實驗無法進行,。
f,、在流動相配制好后,,一定要進行脫氣,。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
3,、流動相流速的選擇:
因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效,。對于一根特定的色譜柱,要追求*柱效,,使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,,流速一般選擇1ml/min,,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳,。
當選用*流速時,,分析時間可能延長,??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間(如使用反相柱時,,可適當增加甲醇或乙腈的含量)。
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