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各種顯微鏡檢術(shù)介紹
正立式顯微鏡
一,、明視野觀察（Bright field）
明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,，廣泛應(yīng)用于病理、檢驗,，用于觀察被染色的切片,，所有顯微鏡均能完成此功能。在此不再贅述,。
二,、暗視野觀察（Dark field）
暗視野實際是暗場照明發(fā),。它的特點和明視野不同,，不直接觀察到照明的光線，而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線,。因此,，視場成為黑暗的背景，而被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象,。
暗視野的原理是根據(jù)光學(xué)上的丁道爾現(xiàn)象,，微塵在強光直射通過的情況下，人眼不能觀察,，這是因為強光繞射造成的,。若把光線斜射它，由于光的反射,，微粒似乎增大了體積,，為人眼可見。
暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡,。它的特點是不讓光束由下至上的通過被檢物體,，而是將光線改變途徑,，使其斜射向被檢物體，使照明光線不直接進入物鏡,，利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象,。
暗視野觀察的分辨率遠高于明視野觀察，zui高達0.02-0.004mm..
三,、相襯鏡檢法（Phase contrast）
在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過程中,，相襯鏡檢術(shù)的發(fā)明成功，是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就,。我們知道,，人眼只能區(qū)分光波的波長（顏色）和振幅（亮度），對于無色通明的生物標本,，當(dāng)光線通過時,，波長和振幅變化不大，在明場觀察時很難觀察到標本.
相襯顯微鏡利用被檢物體的光程之差進行鏡檢,，也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)象,，將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词故菬o色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見,。這大大便利了活體細胞的觀察,，因此相襯鏡檢法廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡。
相襯鏡檢法在裝置上與明場不同,，有一些特殊要求：
1．環(huán)狀光闌（Ring slit）: 裝在聚光鏡的下方,，而與聚光鏡組合為一體---相襯聚光鏡。它是由大小不同的環(huán)形光闌裝在一圓盤內(nèi),，外面標有10X,、20X、40X,、100X等字樣,，與相對應(yīng)倍數(shù)的物鏡配合使用。
2．相板（Phase plate）: 裝在物鏡的后焦平面處,，它分為兩部分,，一是通過直射光的部分，為半透明的環(huán)狀,，叫共軛面,；另一是通過衍射光的部分，叫"補償面",。有相板的物鏡稱"相襯物鏡",，外殼上常有"Ph"字樣。
相襯鏡檢法是一種比較復(fù)雜的鏡檢方法,，想要得到好的觀察效果,，顯微鏡的調(diào)試非常重要,。除此之外還應(yīng)注意以下幾個方面。
1．光源要強,，全部開啟孔徑光闌,；
2．使用濾色片，使光波近于單色,；
四,、微分干涉稱鏡檢術(shù)（Differential interference contrast DIC）
微分干涉鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代，它不僅能觀察無色透明的物體,，而且圖象呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感,，并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達到的某些優(yōu)點，觀察效果更為逼真,。
1．原理
微分干涉稱鏡檢術(shù)是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來分解光束,。分裂出來的光束的振動方向相互垂直且強度相等，光束分別在距離很近的兩點上通過被檢物體,，在相位上略有差別,。由于兩光束的裂距極小，而不出現(xiàn)重影現(xiàn)象,，使圖象呈現(xiàn)出立體的三維感覺,。
2．微分干涉稱鏡檢術(shù)所需的特殊部件：
（1） 起偏鏡
（2） 檢偏鏡
（3） 渥拉斯頓棱鏡2 塊
3．微分干涉稱鏡檢時的注意事項
（1）因微分干涉襯靈敏度高，制片表面不能有污物和灰塵,。
（2）具有雙折射性的物質(zhì),，不能達到微分干涉襯鏡檢鏡檢的效果。
（3）倒置顯微鏡應(yīng)用微分干涉襯時,，不能用塑料培養(yǎng)皿,。
五、熒光鏡檢術(shù)
熒光鏡檢術(shù)是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體,，使之受激發(fā)后而產(chǎn)生長波長的熒光,，然后觀察,。熒光鏡檢術(shù)廣泛應(yīng)用于生物,，醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。
1．熒光鏡檢術(shù)一般分為透射和落射式兩種類型,。
（1）透射式：激發(fā)光來自被檢物體的下方,，聚光鏡為暗視野聚光鏡，使激發(fā)光不進入物鏡,，而使熒光進入物鏡,。它在低倍情況下明亮,，而高倍則暗，在油浸和調(diào)中時,，較難操作，尤以低倍的照明范圍難于確定,，但能得到很暗的視野背景。透射式不使用于非透明的被檢物體。
（2）落射式：透射式目前幾乎被淘汰,，新型的熒光顯微鏡多為落射式，光源來自被檢物體的上方,，在光路中具有分光鏡,，所以對透明和不透明的被檢物體都適用。由于物鏡起了聚光鏡的作用,，不僅便于操作,，而且從低倍到高倍，可以實現(xiàn)整個視場的均勻照明,。
2．熒光鏡檢術(shù)的注意事項
（1） 激發(fā)光長時間的照射,，會發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象，因此盡可能縮短觀察時間,，暫時不觀察時,，應(yīng)用擋板遮蓋激發(fā)光。
（2）作油鏡觀察時,，應(yīng)用“無熒光油”,。
（3）熒光幾乎都較弱，應(yīng)在較暗的室內(nèi)進行,。
（4）電源裝穩(wěn)壓器,，否則電壓不穩(wěn)不僅會降低汞燈的壽命，也會影響鏡檢的效果,。
目前許多新興生物研究領(lǐng)域應(yīng)用到熒光顯微鏡,，如基因原位雜交（FISH）等等。
偏光顯微鏡（Polarizing microscope ）
一,、偏光顯微鏡的特點
偏光顯微鏡是鑒定物質(zhì)細微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡,。凡具有雙折射的物質(zhì)，在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,，當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色發(fā)來進行觀察,，但有些則不可能，而必須利用偏光顯微鏡,。
偏光顯微鏡的特點,，就是將普通改變?yōu)槠膺M行鏡檢的方法，以鑒別某一物質(zhì)是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）,。
雙折射性是晶體的基本特性,。因此，偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物，化學(xué)等領(lǐng)域,。在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用,。
二、偏光顯微鏡的基本原理
偏光顯微鏡的原理比較復(fù)雜,，在此不作過多介紹,偏光顯微鏡必須具備以下附件（a）起偏鏡 （b）檢偏鏡 （c）無應(yīng)力物鏡 （d）旋轉(zhuǎn)載物臺,。
三、偏光鏡檢術(shù)的方式
（一） 正相鏡檢（Orthscope）:又稱無畸變鏡檢,，其特點是使用低倍物鏡,，不用伯特蘭透鏡（Bertrand Lens）,同時為使照明孔徑變小，推開聚光鏡的上透鏡,。
正相鏡檢用于檢查物體的雙折射性,。
（二） 錐光鏡檢（Conoscope）：又稱干涉鏡檢，這種方法用于觀察物體的單軸或雙軸性,。
四,、 偏光顯微鏡在裝置上的要求
（一） 光源：采用單色光，因為光的速度,，折射率,，和干涉現(xiàn)象由于波長的不同而有差異。一般鏡檢可使用普通光,。
（二） 目鏡：要帶有十字線的目鏡,。
（三） 聚光鏡：為了取得平行偏光，應(yīng)使用能推出上透鏡的搖出式聚光鏡,。
（四） 伯特蘭透鏡：這是把物體所有造成的初級相放大為次級相的輔助透鏡,。
五、偏光鏡檢術(shù)的要求
（一） 載物臺的中心與光軸同軸,。
（二） 起偏鏡和檢偏鏡應(yīng)處于正交位置,。
（三） 制片不宜過薄。
倒置顯微鏡（Inverted microscope）
前面講的是正立式顯微鏡的鏡檢方式,，主要用于切片的觀察,。而倒置顯微鏡是為了適應(yīng)生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中的組織培養(yǎng),、細胞離體培養(yǎng),、浮游生物、環(huán)境保護,、食品檢驗等顯微觀察,。
由于上述樣品特點的限制,，被檢物體均放置在培養(yǎng)皿（或培養(yǎng)瓶）中,，這樣就要求倒置顯微鏡的物鏡和聚光鏡的工作距離很長，能直接對培養(yǎng)皿中的被檢物體進行顯微觀察和研究。因此,，物鏡,、聚光鏡和光源的位置都顛倒過來，故稱為“倒置顯微鏡”,。
由于工作距離的限制,，倒置顯微鏡物鏡的zui大放大率為60X。一般研究用倒置顯微鏡都配置有4X,、10X,、20X、及40X 相差物鏡,，因為倒置顯微鏡多用于無色透明的活體觀察,。如果用戶有特殊需要，也可以選配其它附件,，用來完成微分干涉,、熒光及簡易偏光等觀察。
目前倒置顯微鏡廣泛應(yīng)用于patch-clamp ,transgene ICSI 等領(lǐng)域,。
體視顯微鏡（Stereo microscope）
體視顯微鏡又稱“實體顯微鏡”或“解剖鏡”,，是一種具有正象立體感地目視儀器，被廣泛地應(yīng)用于生物學(xué),、醫(yī)學(xué),、農(nóng)林、工業(yè)及海洋生物各部門,。它具有如下地特點：
1． 雙目鏡筒中的左右兩光束不是平行,，而是具有一定的夾角---體視角（一般為12度---15度），因此成象具有三維立體感,；
2． 象是直立的,，便于操作和解剖，這是由于在目鏡下方的棱鏡把象倒轉(zhuǎn)過來的緣故,；
3． 雖然放大率不如常規(guī)顯微鏡,，但其工作距離很長
4． 焦深大，便于觀察被檢物體的全層,。
5． 視場直徑大,。
目前體視鏡的光學(xué)結(jié)構(gòu)是：由一個共用的初級物鏡，對物體成象后的兩光束被兩組中間物鏡----變焦鏡分開,，并成一體視角再經(jīng)各自的目鏡成象,，它的倍率變化是由改變中間鏡組之間的距離而獲得的，因此又稱為“連續(xù)變倍體視顯微鏡”（Zoom—stereo microscope）,。
隨著應(yīng)用的要求,，目前體視鏡可選配豐富的選購附件,，如熒光，照相,，攝象,，冷光源等等。