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顯微鏡的七種觀察方式
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明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,，廣泛應(yīng)用于病理,、檢驗,，用于觀察被染色的切片,，所有顯微鏡均能完成此功能,。 暗視野實際是暗場照明發(fā)。它的特點和明視野不同,，不直接觀察到照明的光線,，而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此,，視場成為黑暗的背景,，而被檢物體則呈現(xiàn)明亮的象。 暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡,。它的特點是不讓光束由下至上的通過被檢物體，而是將光線改變途徑,，使其斜射向被檢物體,，使照明光線不直接進入物鏡，利用被檢物體表面反射或衍射光形成的明亮圖象,。暗視野觀察的分辨率遠高于明視野觀察,，zui高達0.02—0.004。 在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過程中,，相差鏡檢術(shù)的發(fā)明成功，是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就,。我們知道,，人眼只能區(qū)分光波的波長（顏色）和振幅（亮度），對于無色通明的生物標(biāo)本,，當(dāng)光線通過時,，波長和振幅變化不大，在明場觀察時很難觀察到標(biāo)本,。 相差顯微鏡的基本原理是,，把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度,，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見,。光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射，偏離了原來的光路,，同時被延遲了1/4λ（波長）,，如果再增加或減少1/4λ，則光程差變?yōu)?/2λ,，兩束光合軸后干涉加強,，振幅增大或減下，提高反差,。在構(gòu)造上,，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處： 1、環(huán)形光闌（annulardiaphragm）位于光源與聚光器之間,，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,，焦聚到標(biāo)本上,。 2、相位板（annularphaseplate）在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ,。分為兩種： （1）A+相板：將直射光推遲1/4λ，兩組光波合軸后光波相加,，振幅加大,，標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮，形成亮反差（或稱負反差）,。 （2）B+相板：將衍射光推遲1/4λ,，兩組光線合軸后光波相減，振幅變小,，形成暗反差（或稱正反差）,，結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗
微分干涉鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代,，它不僅能觀察無色透明的物體,，而且圖象呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感，并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達到的某些優(yōu)點,，觀察效果更為逼真,。 原理： 微分干涉鏡檢術(shù)是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來分解光束。分裂出來的光束的振動方向相互垂直且強度相等,，光束分別在距離很近的兩點上通過被檢物體,，在相位上略有差別。由于兩光束的裂距極小,，而不出現(xiàn)重影現(xiàn)象,，使圖象呈現(xiàn)出立體的三維感覺。 DIC顯微鏡的物理原理*不同于相差顯微鏡,，技術(shù)設(shè)計要復(fù)雜得多。DIC利用的是偏振光,，有四個特殊的光學(xué)組件：偏振器（polarizer）,、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器（analyzer）,。偏振器直接裝在聚光系統(tǒng)的前面,，使光線發(fā)生線性偏振。在聚光器中則安裝了偌瑪斯斯棱鏡,，即DIC棱鏡,，此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光（x和y），二者成一小夾角,。聚光器將兩束光調(diào)整成與顯微鏡光軸平行的方向,。zui初兩束光相位一致,，在穿過標(biāo)本相鄰的區(qū)域后，由于標(biāo)本的厚度和折射率不同,，引起了兩束光發(fā)生了光程差,。在物鏡的后焦面處安裝了第二個偌瑪斯斯棱鏡，即DIC滑行器,，它把兩束光波合并成一束,。 這時兩束光的偏振面（x和y）仍然存在。zui后光束穿過第二個偏振裝置,，即檢偏器,。在光束形成目鏡DIC影像之前，檢偏器與偏光器的方向成直角,。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光,，從而使二者發(fā)生干涉。x和y波的光程差決定著透光的多少,。光程差值為0時,，沒有光穿過檢偏器；光程差值等于波長一半時,，穿過的光達到zui大值,。于是在灰色的背景上，標(biāo)本結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出亮暗差,。為了使影像的反差達到*狀態(tài),，可通過調(diào)節(jié)DIC滑行器的縱行微調(diào)來改變光程差，光程差可改變影像的亮度,。調(diào)節(jié)DIC滑行器可使標(biāo)本的細微結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出正或負的投影形象,，通常是一側(cè)亮，而另一側(cè)暗,，這便造成了標(biāo)本的人為三維立體感,，類似大理石上的浮雕。
偏光顯微鏡是鑒定物質(zhì)細微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡,。凡具有雙折射的物質(zhì)，在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚,，當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色發(fā)來進行觀察,，但有些則不可能，而必須利用偏光顯微鏡,。 偏光顯微鏡的特點,，就是將普通改變?yōu)槠膺M行鏡檢的方法，以鑒別某一物質(zhì)是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）,。雙折射性是晶體的基本特性,。因此,，偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物，化學(xué)等領(lǐng)域,。在生物學(xué)和植物學(xué)也有應(yīng)用,。
1975年,，RobertHoffman博士發(fā)明 2002年,，到期，各顯微鏡廠家紛紛推出采用以自己名義命名的RC技術(shù)產(chǎn)品 原理： 斜射光照射到標(biāo)本產(chǎn)生折射,、衍射,，光線通過物鏡光密度梯度調(diào)節(jié)器產(chǎn)生不同陰影，從而使透明標(biāo)本表面產(chǎn)生明暗差異,，增加觀察對比度,。 特點： 提高未染色標(biāo)本的可見性和對比度； 圖象顯示陰影或近似三維結(jié)構(gòu)而不會產(chǎn)生光暈,； 可檢測雙折射物質(zhì)（巖石切片,、水晶、骨頭）,； 可檢測玻璃,塑料等培養(yǎng)皿中的細胞,器官和組織,； 聚光鏡的工作距離可以設(shè)計的更長； RC物鏡也可用于明場,暗場和熒光觀察
熒光鏡檢術(shù)是用短波長的光線照射用熒光素染色過的被檢物體,，使之受激發(fā)后而產(chǎn)生長波長的熒光，然后觀察,。 優(yōu)點： · 檢出能力高（放大作用） · 對細胞的刺激?。梢曰铙w染色） · 能進行多重染色 用途： · 物體構(gòu)造的觀察——熒光素 · 熒光的有無、色調(diào)比較進行物質(zhì)判別——抗體熒光等 · 發(fā)熒光量的測定對物質(zhì)定性,、定量分析
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