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Anti-Phospho-EEF2k （Ser366） 磷酸化真核延伸因子激酶2抗體

一抗

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多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟：
　　1,、制備抗原。 　
　2,、選擇實(shí)驗(yàn)動物,。
　　3、動物免疫,。 　
　4,、試取血進(jìn)行測試，看看是否成功免疫,。
　　5,、如果成功免疫，殺死實(shí)驗(yàn)動物,，采集全部血清,。
　　6、純化出抗體,。 　
　7,、鑒定抗體。包括純度以及特異性,。
　
　單克隆抗體：
　?。╩onoclonal antibody，McAb）克隆選擇學(xué)說：淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體,，一種細(xì)胞帶一種受體,，進(jìn)入機(jī)體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個(gè)別淋巴細(xì)胞，使之活化,，增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群,，分泌同樣的抗體。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi),，在機(jī)體中就會誘導(dǎo)出針對不同抗原決定簇的多種抗體,，如果要把這些抗體一一分開,，用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的。1975年科勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合,，培養(yǎng)出既能迅速生長無限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞,。從而獲得針對某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體。1995年,，Katherine Knight博士在美國芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞（Plasmacytoma）,，開創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù)。與鼠單抗相比,，兔單抗具有：首先,，兔抗血清通常含有高親和力抗體，可以比鼠抗血清識別更多種類的表位,；其次,，兔單克隆抗體能夠識別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原；第三,，由于兔脾臟較大,，可以更多進(jìn)行的融合試驗(yàn)，使得高通量篩選融合成
抗體的特異性鑒定 ：
抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力,?？贵w的特異性高，它的識別能力就強(qiáng),。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示,。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗(yàn)測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,，計(jì)算各自的結(jié)合率,，求出各自在 IC50時(shí)的濃度，并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率,。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,，而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時(shí)，表示 這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為 0,，即該血清的特異性較好,。<
抗體的效價(jià)鑒定：
不管是用于診斷還是用于治療，制備抗體的目的都是要求較高效價(jià),。不同的抗原制備的抗體,，要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多,，包括有試管凝集反應(yīng),、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等,。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,，以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定,。按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能分類：
　　按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能，可將其分為IgM,、IgG,、IgA、IgE,、IgD五類,。
　　IgM抗體是免疫應(yīng)答中首先分泌的抗體。它們在與抗原結(jié)合后啟動補(bǔ)體的級聯(lián)反應(yīng),。它們還把入侵者相互連接起來,，聚成一堆便于巨噬細(xì)胞的吞噬；
　 IgG抗體激活補(bǔ)體,，中和多種毒素,。IgG持續(xù)的時(shí)間長，是*能在母親妊娠期穿過胎盤保護(hù)胎兒的抗體,。他們還從乳腺分泌進(jìn)入初乳,，使新生兒得到保護(hù)；
　　IgA抗體進(jìn)入身體的黏膜表面,，包括呼吸,、消化、生殖等管道的黏膜,，中和感染因子,。還可以通過母乳的初乳把這種抗體輸送到新生兒的消化道黏膜中，是在母乳中含量zui多,，zui為重要的一類抗體,；
　　IgE抗體的尾部與嗜堿細(xì)胞、肥大細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)合,。當(dāng)抗體與抗原結(jié)合后,，嗜堿細(xì)胞與肥大細(xì)胞釋放組織胺一類物質(zhì)促進(jìn)炎癥的發(fā)展。這也是引發(fā)速發(fā)型過敏反應(yīng)的抗體,；
　　IgD抗體的作用還不太清楚,。它們主要出現(xiàn)在成熟的B淋巴細(xì)胞表面上，可能與B細(xì)胞的分化有關(guān),。
（IgD于1995年從人骨髓瘤蛋白中發(fā)現(xiàn),，分子量為175kD，主要由扁桃體,、脾等處漿細(xì)胞產(chǎn)生,，人血清中IgD濃度為3～40μg/ml,不到血清總Ig的1%,，在個(gè)體發(fā)育中合成較晚。IgD鉸鏈區(qū)很長,，且對蛋白酶水解敏感,，因此IgD半衰期很短，僅2.8天,。血清中IgD確切的免疫功能尚不清楚,。在B細(xì)胞分化到成熟B細(xì)胞階段，除了表達(dá)SmIgD,，抗原刺激后表現(xiàn)為免疫耐受,。成熟B細(xì)胞活化后或者活化后或者變成記憶B細(xì)胞時(shí)，SmIgD逐br/>