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相關(guān)知識(shí)>>>>>

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟:
  1,、制備抗原,。  
 2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,。
  3,、動(dòng)物免疫。  
 4,、試取血進(jìn)行測(cè)試,,看看是否成功免疫。
  5、如果成功免疫,,殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,,采集全部血清。
  6,、純化出抗體,。  
 7、鑒定抗體,。包括純度以及特異性,。
 
  zui初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分,故曾把抗體統(tǒng)稱為丙種(γ)球蛋白,。后來(lái)發(fā)現(xiàn),,抗體并不都在γ區(qū);并且位于γ區(qū)的球蛋白,,也不一定都具有抗體活性,。
   1964年,世界衛(wèi)生組織舉行專門(mén)會(huì)議,,將具有抗體活性以及與抗體相關(guān)的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白(Ig),,如骨髓瘤蛋白,巨球蛋白血癥,、冷球蛋白血癥等患者血清中存在的異常免疫球蛋白以及正常人天然存在的免疫球蛋白亞單位等,。因而免疫球蛋白是結(jié)構(gòu)化學(xué)的概念,而抗體是生物學(xué)功能的概念,??梢哉f(shuō),幾乎所有抗體都是免疫球蛋白(極少數(shù)抗體為RNA),,但并非所有免疫球蛋白都是抗體,。<抗體結(jié)構(gòu):
  抗體是具有4條多肽鏈的對(duì)稱結(jié)構(gòu),其中2條較長(zhǎng),、相對(duì)分子量較大的相同的重鏈(H鏈),;2條較短、相對(duì)分子量較小的相同的輕鏈(L鏈),。鏈間由二硫鍵和非共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)形成一個(gè)由4條多肽鏈構(gòu)成的單體分子,。輕鏈有κ和λ兩種,重鏈有μ,、δ,、γ、ε和α五種,。 整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分,。在給定的物種中,不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列??勺儏^(qū)位于"Y"的兩臂末端,。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強(qiáng)烈,這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發(fā)生變異區(qū)域稱高變區(qū),。高變區(qū)位于分子表面,,zui多由17個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成,少則只有2 ~ 3個(gè),。高變區(qū)氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原抗原的特異性,。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的,位于兩臂末端稱抗原結(jié)合片段(antigen-binding fragment, Fab),。"Y"的柄部稱結(jié)晶片段(crystalline fragment,FC),,糖結(jié)合在FC
抗體規(guī)律:
  (1)初次反應(yīng)產(chǎn)生抗體:當(dāng)抗原*次進(jìn)入機(jī)體時(shí),,需經(jīng)一定的潛伏期才能產(chǎn)生抗體,,且抗體產(chǎn)生的量也不多,在體內(nèi)維持的時(shí)間也較短,。
 ?。?)再次反應(yīng)產(chǎn)生抗體:當(dāng)相同抗原第二次進(jìn)入機(jī)體后,開(kāi)始時(shí),,由于原有抗體中的一部分與再次進(jìn)入的抗原結(jié)合,,可使原有抗體量略為降低。隨后,,抗體效價(jià)迅速大量增加,,可比初次反應(yīng)產(chǎn)生的多幾倍到幾十倍,在體內(nèi)留存的時(shí)間亦較長(zhǎng),。
  (3)回憶反應(yīng)產(chǎn)生抗體:由抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體,,經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后可逐漸消失,。此時(shí)若再次接觸抗原,可使已消失的抗體快速上升,。如再次刺激機(jī)體的抗原與初次相同,,則稱為特異性回憶反應(yīng);若與初次反應(yīng)不同,,則稱為非特異性回憶反應(yīng),。非特異性回憶反應(yīng)引起的抗體的上升是暫時(shí)性的,短時(shí)間內(nèi)即很快下降
標(biāo)記抗體:
   抗體經(jīng)過(guò)酶標(biāo)記,、鐵蛋白標(biāo)記或通過(guò)膠體金標(biāo)記獲得標(biāo)記抗體,,是免疫電鏡樣品制備的一種方法,用于觀察抗原抗體免疫復(fù)合物方面研究的手段。


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