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抗體的特異性鑒定 :
抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力??贵w的特異性高,,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示,。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定,。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線,計(jì)算各自的結(jié)合率,,求出各自在 IC50時(shí)的濃度,,并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率,。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí),,表示 這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為 0,,即該血清的特異性較好。<
抗體的效價(jià)鑒定:
不管是用于診斷還是用于治療,,制備抗體的目的都是要求較高效價(jià),。不同的抗原制備的抗體,要求的效價(jià)不一,。鑒定效價(jià)的方法很多,,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等,。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較,。如制備抗抗體的效價(jià),,一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。單克隆抗體:
 ?。╩onoclonal antibody,,McAb)克隆選擇學(xué)說(shuō):淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體,一種細(xì)胞帶一種受體,,進(jìn)入機(jī)體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個(gè)別淋巴細(xì)胞,,使之活化,增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群,,分泌同樣的抗體,。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi),,在機(jī)體中就會(huì)誘導(dǎo)出針對(duì)不同抗原決定簇的多種抗體,,如果要把這些抗體一一分開(kāi),用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的,。1975年科勒(Kohler)和米爾斯坦(Milstein)將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合,,培養(yǎng)出既能迅速生長(zhǎng)無(wú)限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。從而獲得針對(duì)某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體,。1995年,,Katherine Knight博士在美國(guó)芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞(Plasmacytoma),開(kāi)創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù),。與鼠單抗相比,,兔單抗具有:首先,兔抗血清通常含有高親和力抗體,,可以比鼠抗血清識(shí)別更多種類的表位,;其次,,兔單克隆抗體能夠識(shí)別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原;第三,,由于兔脾臟較大,,可以更多進(jìn)行的融合試驗(yàn),使得高通量篩選融合成
抗體的效價(jià)鑒定:
不管是用于診斷還是用于治療,,制備抗體的目的都是要求較高效價(jià),。不同的抗原制備的抗體,要求的效價(jià)不一,。鑒定效價(jià)的方法很多,,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等,。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較,。如制備抗抗體的效價(jià),,一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。生物活性:
 ?。?)特異性結(jié)合抗原:抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞,,通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁(yè)p傷。然而,,抗體可通過(guò)與病毒或毒素的特異性結(jié)合,,直接發(fā)揮中和病毒的作用。  
?。?)激活補(bǔ)體:IgM,、IgG1、IgG2和IgG3可通過(guò)經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體,,凝聚的IgA,、IgG4和IgE可通過(guò)替代途徑激活補(bǔ)體。
 ?。?)結(jié)合細(xì)胞:不同類別的免疫球蛋白,,可結(jié)合不同種的細(xì)胞,產(chǎn)生不同的疚,,參與免疫應(yīng)答,。
  (4)可通過(guò)胎盤(pán)及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血流中,,使胎兒形成自然被動(dòng)免疫,。免疫球蛋白A(IgA)可通過(guò)消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素,。
 ?。?)具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),,也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,,各具有不同的抗原性,。
  (6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,,60~70℃即被破壞,。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用,??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,,再經(jīng)透析法將其純化。
 ?。?)通過(guò)與細(xì)胞Fc受體結(jié)合發(fā)揮多種生物效應(yīng)  ?、僬{(diào)理作用   IgG、IgM的Fc段與吞噬細(xì)胞表面的FcγR,、FcμR結(jié)合,,增強(qiáng)其吞噬能力,通常將抗體促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬功能的作用稱為抗體的調(diào)理作用 (opsonization),。  ?、诎l(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)


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