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PSCA （Prostate Stem Cell Anti-gen） 前列腺干細(xì)胞抗原

蛋白質(zhì)及多肽合成

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相關(guān)知識>>>>>

單克隆抗體：
　?。╩onoclonal antibody,，McAb）克隆選擇學(xué)說：淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體，一種細(xì)胞帶一種受體,，進(jìn)入機(jī)體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個(gè)別淋巴細(xì)胞,，使之活化，增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群,，分泌同樣的抗體,。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi)，在機(jī)體中就會誘導(dǎo)出針對不同抗原決定簇的多種抗體,，如果要把這些抗體一一分開,，用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的。1975年科勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合,，培養(yǎng)出既能迅速生長無限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞,。從而獲得針對某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體。1995年,，Katherine Knight博士在美國芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞（Plasmacytoma）,，開創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù)。與鼠單抗相比,，兔單抗具有：首先,，兔抗血清通常含有高親和力抗體，可以比鼠抗血清識別更多種類的表位,；其次,，兔單克隆抗體能夠識別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原；第三,，由于兔脾臟較大,，可以更多進(jìn)行的融合試驗(yàn)，使得高通量篩選融合成為可能,。
抗體規(guī)律：
　?。?）初次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)抗原*次進(jìn)入機(jī)體時(shí)，需經(jīng)一定的潛伏期才能產(chǎn)生抗體,，且抗體產(chǎn)生的量也不多,，在體內(nèi)維持的時(shí)間也較短。
　?。?）再次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)相同抗原第二次進(jìn)入機(jī)體后,，開始時(shí)，由于原有抗體中的一部分與再次進(jìn)入的抗原結(jié)合,，可使原有抗體量略為降低,。隨后,，抗體效價(jià)迅速大量增加，可比初次反應(yīng)產(chǎn)生的多幾倍到幾十倍,，在體內(nèi)留存的時(shí)間亦較長,。
　　（3）回憶反應(yīng)產(chǎn)生抗體：由抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體,，經(jīng)過一定時(shí)間后可逐漸消失,。此時(shí)若再次接觸抗原，可使已消失的抗體快速上升,。如再次刺激機(jī)體的抗原與初次相同，則稱為特異性回憶反應(yīng),；若與初次反應(yīng)不同,，則稱為非特異性回憶反應(yīng)。非特異性回憶反應(yīng)引起的抗體的上升是暫時(shí)性的,，短時(shí)間內(nèi)即很快下降,。
蛋白質(zhì)與多肽的：
多肽：通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽，它們的分子量低于10,，000Da（Dalton,，道爾頓），能透過半透膜,，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀,。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）；10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽,；由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),。
蛋白質(zhì)：生物體中廣泛存在的一類生物大分子，由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈,，經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的,、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈,，再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物,。
就是：都是由20種基本氨基酸通過肽鍵連接而成的。
多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別：
　　蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡寫為：C,、H,、O、N等元素→氨基酸→多肽（肽鏈）→蛋白質(zhì),。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個(gè)層次,，區(qū)別如下：
　　①多肽和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異,。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級結(jié)構(gòu)形式,，而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu),。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的，一個(gè)蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成（如高等動(dòng)物的細(xì)胞色素c是由104個(gè)氨基酸殘基的一條肽鏈組成）,，也可由多條肽鏈通過一定的化學(xué)鍵（肯定不是肽鍵,，如二硫鍵、氫鍵等）連接而成（如胰島素由2條肽鏈組成,、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成,、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等）,。
　?、诙嚯呐c蛋白質(zhì)的功能有差異。多肽往往是無生物活性,，而蛋白質(zhì)是具有生物活性的,。多肽一般無活性（如蛋白質(zhì)在胃、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽）,，少數(shù)有活性（如抗利尿激素就是多肽類激素）,，與蛋白質(zhì)相比，多肽的分子量較小,，沒有空間結(jié)構(gòu),，一般無活性；蛋白質(zhì)的分子量較大,，有空間結(jié)構(gòu),，有活性（變性后活性下降或消失，活性消失叫做失活）
　　因此,，一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實(shí)際上不能稱為蛋白質(zhì),。
多肽合成：
是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過程，固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成,。過去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法,。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來，經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善,，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù),，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn)，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度,。多肽合成總的來說分成兩種：固相合成和液相多肽合成,。
多克隆抗體：
定義1：由多個(gè)B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體，可與不同抗原表位結(jié)合且免疫球蛋白類別各異,。
所屬學(xué)科：免疫學(xué)（一級學(xué)科）,；免疫系統(tǒng)（二級學(xué)科）；免疫分子（三級學(xué)科）
定義2：對特定抗原所產(chǎn)生的一組免疫球蛋白混合物,，每種免疫球蛋白能識別抗原分子上的一個(gè)表位,。
所屬學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級學(xué)科）,；總論（二級學(xué)科）
定義3：多種抗原表位刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)后，機(jī)體產(chǎn)生的針對不同抗原表位的混合抗體,。
所屬學(xué)科：細(xì)胞生物學(xué)（一級學(xué)科）,；細(xì)胞免疫（二級學(xué)科）
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟：
　　1、制備抗原,。 　
　2,、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
　　3,、動(dòng)物免疫,。 　
　4、試取血進(jìn)行測試,，看看是否成功免疫,。
　　5、如果成功免疫,，殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采集全部血清,。
　　6,、純化出抗體。 　
　7,、鑒定抗體,。包括純度以及特異性。