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Anti-AP2 alpha 轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α

一抗

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抗體的效價鑒定：
不管是用于診斷還是用于治療,，制備抗體的目的都是要求較高效價,。不同的抗原制備的抗體，要求的效價不一,。鑒定效價的方法很多,，包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等,。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法，以資比較,。如制備抗抗體的效價,，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來鑒定。多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟：
　　1,、制備抗原,。 　
　2、選擇實(shí)驗(yàn)動物,。
　　3,、動物免疫。 　
　4,、試取血進(jìn)行測試,，看看是否成功免疫。
　　5,、如果成功免疫,，殺死實(shí)驗(yàn)動物，采集全部血清,。
　　6,、純化出抗體。 　
　7,、鑒定抗體,。包括純度以及特異性。
　
　蛋白質(zhì)與多肽的：
多肽：通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,，它們的分子量低于10,，000Da（Dalton，道爾頓）,，能透過半透膜,，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀,。也有文獻(xiàn)把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）；10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽,；由50個以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),。
蛋白質(zhì)：生物體中廣泛存在的一類生物大分子，由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈,，經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的,、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈,，再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物,。
就是：都是由20種基本氨基酸通過肽鍵連接而成的。
多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別：
　　蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡寫為：C,、H,、O、N等元素→氨基酸→多肽（肽鏈）→蛋白質(zhì),。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個層次,，區(qū)別如下：
　?、俣嚯暮偷鞍踪|(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異,。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級結(jié)構(gòu)形式，而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu),。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的,，一個蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成（如高等動物的細(xì)胞色素c是由104個氨基酸殘基的一條肽鏈組成），也可由多條肽鏈通過一定的化學(xué)鍵（肯定不是肽鍵,，如二硫鍵,、氫鍵等）連接而成（如胰島素由2條肽鏈組成、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成,、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成,、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等）。
　?、诙嚯呐c蛋白質(zhì)的功能有差異,。多肽往往是無生物活性，而蛋白質(zhì)是具有生物活性的,。多肽一般無活性（如蛋白質(zhì)在胃,、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽），少數(shù)有活性（如抗利尿激素就是多肽類激素）,，與蛋白質(zhì)相比,，多肽的分子量較小，沒有空間結(jié)構(gòu),，一般無活性,；蛋白質(zhì)的分子量較大,，有空間結(jié)構(gòu)，有活性（變性后活性下降或消失,，活性消失叫做失活）
　　因此,，一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實(shí)際上不能稱為蛋白質(zhì)。
多肽合成：
是一個重復(fù)添加氨基酸的過程,，固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成,。過去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來,，經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善,，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用技術(shù)，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn),，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度,。多肽合成總的來說分成兩種：固
生物活性：
　　（1）特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞,，通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷,。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合,，直接發(fā)揮中和病毒的作用,。 　
　（2）激活補(bǔ)體：IgM,、IgG1,、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體，凝聚的IgA,、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補(bǔ)體,。
　　（3）結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白,，可結(jié)合不同種的細(xì)胞,，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答,。
　?。?）可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫,。免疫球蛋白A（IgA）可通過消化道及呼吸道粘膜,，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
　?。?）具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì),，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性,。
　?。?）抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞,。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀,。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,，再經(jīng)透析法將其純化,。
　　（7）通過與細(xì)胞Fc受體結(jié)合發(fā)揮多種生物效應(yīng) 　?、僬{(diào)理作用 　　IgG,、IgM的Fc段與吞噬細(xì)胞表面的FcγR、FcμR結(jié)合,，增強(qiáng)其吞噬能力,，通常將抗體促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬功能的作用稱為抗體的調(diào)理作用 （opsonization）。 　?、诎l(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)
單克隆抗體：
　?。╩onoclonal antibody，McAb）克隆選擇學(xué)說：淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體,，一種細(xì)胞帶一種受體,，進(jìn)入機(jī)體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個別淋巴細(xì)胞,，使之活化,，增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群，分泌同樣的抗體,。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi),，在機(jī)體中就會誘導(dǎo)出針對不同抗原決定簇的多種抗體，如果要把這些抗體一一分開,，用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的,。1975年科勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合，培養(yǎng)出既能迅速生長無限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞,。從而獲得針對某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體,。1995年，Katherine Knight博士在美國芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞（Plasmacytoma）,，開創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù),。與鼠單抗相比，兔單抗具有：首先,，兔抗血清通常含有高親和力抗體,，可以比鼠抗血清識別更多種類的表位,；其次，兔單克隆抗體能夠識別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原,；第三,，由于兔脾臟較大，可以更多進(jìn)行的融合試驗(yàn),，使得高通量篩選融合成