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Anti-phospho-4EBP1（Ser64） 磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體

一抗

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抗體的特異性鑒定 ：
抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力,?？贵w的特異性高，它的識(shí)別能力就強(qiáng),。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示,。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線,，計(jì)算各自的結(jié)合率,，求出各自在 IC50時(shí)的濃度，并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率,。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,，而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí)，表示 這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為 0,，即該血清的特異性較好,。<
蛋白質(zhì)與多肽的：
多肽：通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽，它們的分子量低于10,，000Da（Dalton,，道爾頓）,，能透過(guò)半透膜，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀,。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）,；10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽；由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),。
蛋白質(zhì)：生物體中廣泛存在的一類生物大分子,，由核酸編碼的α氨基酸之間通過(guò)α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈，經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的,、有活性的大分子,。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈，再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物,。
就是：都是由20種基本氨基酸通過(guò)肽鍵連接而成的,。
多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別：
　　蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡(jiǎn)寫為：C、H,、O,、N等元素→氨基酸→多肽（肽鏈）→蛋白質(zhì)。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個(gè)層次,，區(qū)別如下：
　?、俣嚯暮偷鞍踪|(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級(jí)結(jié)構(gòu)形式,，而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu),。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的，一個(gè)蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成（如高等動(dòng)物的細(xì)胞色素c是由104個(gè)氨基酸殘基的一條肽鏈組成）,，也可由多條肽鏈通過(guò)一定的化學(xué)鍵（肯定不是肽鍵,，如二硫鍵、氫鍵等）連接而成（如胰島素由2條肽鏈組成,、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成,、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等）,。
　?、诙嚯呐c蛋白質(zhì)的功能有差異。多肽往往是無(wú)生物活性,，而蛋白質(zhì)是具有生物活性的,。多肽一般無(wú)活性（如蛋白質(zhì)在胃、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽）,，少數(shù)有活性（如抗利尿激素就是多肽類激素）,，與蛋白質(zhì)相比，多肽的分子量較小,，沒有空間結(jié)構(gòu),，一般無(wú)活性,；蛋白質(zhì)的分子量較大，有空間結(jié)構(gòu),，有活性（變性后活性下降或消失,，活性消失叫做失活）
　　因此，一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實(shí)際上不能稱為蛋白質(zhì),。
多肽合成：
是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過(guò)程,，固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。過(guò)去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法,。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來(lái)，經(jīng)過(guò)不斷的改進(jìn)和完善,，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù),，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn)，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度,。多肽合成總的來(lái)說(shuō)分成兩種：固
按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能分類：
　　按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能,，可將其分為IgM、IgG,、IgA,、IgE、IgD五類,。
　　IgM抗體是免疫應(yīng)答中首先分泌的抗體,。它們?cè)谂c抗原結(jié)合后啟動(dòng)補(bǔ)體的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。它們還把入侵者相互連接起來(lái),，聚成一堆便于巨噬細(xì)胞的吞噬,；
　 IgG抗體激活補(bǔ)體，中和多種毒素,。IgG持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng),，是*能在母親妊娠期穿過(guò)胎盤保護(hù)胎兒的抗體。他們還從乳腺分泌進(jìn)入初乳,，使新生兒得到保護(hù),；
　　IgA抗體進(jìn)入身體的黏膜表面，包括呼吸,、消化,、生殖等管道的黏膜，中和感染因子,。還可以通過(guò)母乳的初乳把這種抗體輸送到新生兒的消化道黏膜中,，是在母乳中含量zui多，zui為重要的一類抗體,；
　　IgE抗體的尾部與嗜堿細(xì)胞,、肥大細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)合,。當(dāng)抗體與抗原結(jié)合后，嗜堿細(xì)胞與肥大細(xì)胞釋放組織胺一類物質(zhì)促進(jìn)炎癥的發(fā)展,。這也是引發(fā)速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)的抗體,；
　　IgD抗體的作用還不太清楚。它們主要出現(xiàn)在成熟的B淋巴細(xì)胞表面上,，可能與B細(xì)胞的分化有關(guān),。
（IgD于1995年從人骨髓瘤蛋白中發(fā)現(xiàn),，分子量為175kD,，主要由扁桃體、脾等處漿細(xì)胞產(chǎn)生,，人血清中IgD濃度為3～40μg/ml,不到血清總Ig的1%,，在個(gè)體發(fā)育中合成較晚,。IgD鉸鏈區(qū)很長(zhǎng)，且對(duì)蛋白酶水解敏感,，因此IgD半衰期很短,，僅2.8天。血清中IgD確切的免疫功能尚不清楚,。在B細(xì)胞分化到成熟B細(xì)胞階段,，除了表達(dá)SmIgD，抗原刺激后表現(xiàn)為免疫耐受,。成熟B細(xì)胞活化后或者活化后或者變成記憶B細(xì)胞時(shí),，SmIgD逐br/>抗體的親和力 ：
是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的,。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵,、側(cè)鏈相反電荷基因的庫(kù)侖力,、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,，K的單位是L/mol,，通常K的范圍在 108 ～1010 /mol，也有多達(dá) 1014 /mol,?？贵w親和力的測(cè)定對(duì)抗體的篩選，確定抗體的用途,，驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義,。<
抗體結(jié)構(gòu)：
　　抗體是具有4條多肽鏈的對(duì)稱結(jié)構(gòu)，其中2條較長(zhǎng),、相對(duì)分子量較大的相同的重鏈（H鏈）,；2條較短,、相對(duì)分子量較小的相同的輕鏈（L鏈）。鏈間由二硫鍵和非共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)形成一個(gè)由4條多肽鏈構(gòu)成的單體分子,。輕鏈有κ和λ兩種,，重鏈有μ、δ,、γ,、ε和α五種。 整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分,。在給定的物種中,，不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列?？勺儏^(qū)位于"Y"的兩臂末端,。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強(qiáng)烈，這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發(fā)生變異區(qū)域稱高變區(qū),。高變區(qū)位于分子表面，zui多由17個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成,，少則只有2 ～ 3個(gè),。高變區(qū)氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原抗原的特異性。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的,，位于兩臂末端稱抗原結(jié)合片段（antigen-binding fragment, Fab）,。"Y"的柄部稱結(jié)晶片段（crystalline fragment,FC），糖結(jié)合在FC