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食品衛(wèi)生檢驗(yàn)培養(yǎng)基

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相關(guān)知識(shí)>>>>>

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟：
　　1,、制備抗原,。 　
　2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,。
　　3,、動(dòng)物免疫。 　
　4,、試取血進(jìn)行測(cè)試,，看看是否成功免疫。
　　5,、如果成功免疫,，殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采集全部血清,。
　　6,、純化出抗體。 　
　7,、鑒定抗體,。包括純度以及特異性。
　　單克隆抗體：
　?。╩onoclonal antibody,，McAb）克隆選擇學(xué)說：淋巴細(xì)胞在與抗原接觸前就已經(jīng)存在多種多樣的與抗原專一性結(jié)合的受體，一種細(xì)胞帶一種受體,，進(jìn)入機(jī)體的抗原選擇性的結(jié)合其中的個(gè)別淋巴細(xì)胞,，使之活化，增殖產(chǎn)生大量帶有同樣受體的細(xì)胞群,，分泌同樣的抗體,。當(dāng)抗原進(jìn)入體內(nèi)，在機(jī)體中就會(huì)誘導(dǎo)出針對(duì)不同抗原決定簇的多種抗體,，如果要把這些抗體一一分開,，用現(xiàn)有的生物化學(xué)或物理化學(xué)方法是根本辦不到的。1975年科勒（Kohler）和米爾斯坦（Milstein）將小鼠免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞融合,，培養(yǎng)出既能迅速生長(zhǎng)無(wú)限繁殖又可分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞,。從而獲得針對(duì)某一特殊抗原決定簇的單克隆抗體。1995年,，Katherine Knight博士在美國(guó)芝加哥Loyola大學(xué)成功地從轉(zhuǎn)基因兔中獲得了骨髓瘤細(xì)胞（Plasmacytoma）,，開創(chuàng)了兔單克隆抗體技術(shù)。與鼠單抗相比,，兔單抗具有：首先,，兔抗血清通常含有高親和力抗體，可以比鼠抗血清識(shí)別更多種類的表位,；其次,，兔單克隆抗體能夠識(shí)別許多在小鼠中不產(chǎn)生免疫的抗原,；第三，由于兔脾臟較大,，可以更多進(jìn)行的融合試驗(yàn),，使得高通量篩選融合成為可能。
單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別?
抗原上那部分可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu),，叫做抗原決定簇,。一個(gè)抗原上可以有好幾個(gè)不同的抗原決定簇，因而使機(jī)體產(chǎn)生好幾種不同的抗體,，zui終產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞,。只針對(duì)一個(gè)抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個(gè)純系，純系的英文為Clone,，音譯就是克隆,。
由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,，就象導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣,。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇,，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體,，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體,。
抗體規(guī)律：
　?。?）初次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)抗原*次進(jìn)入機(jī)體時(shí)，需經(jīng)一定的潛伏期才能產(chǎn)生抗體,，且抗體產(chǎn)生的量也不多,，在體內(nèi)維持的時(shí)間也較短。
　?。?）再次反應(yīng)產(chǎn)生抗體：當(dāng)相同抗原第二次進(jìn)入機(jī)體后,，開始時(shí)，由于原有抗體中的一部分與再次進(jìn)入的抗原結(jié)合,，可使原有抗體量略為降低,。隨后，抗體效價(jià)迅速大量增加,，可比初次反應(yīng)產(chǎn)生的多幾倍到幾十倍,，在體內(nèi)留存的時(shí)間亦較長(zhǎng)。
　?。?）回憶反應(yīng)產(chǎn)生抗體：由抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體,，經(jīng)過一定時(shí)間后可逐漸消失。此時(shí)若再次接觸抗原，可使已消失的抗體快速上升,。如再次刺激機(jī)體的抗原與初次相同,，則稱為特異性回憶反應(yīng),；若與初次反應(yīng)不同,，則稱為非特異性回憶反應(yīng)。非特異性回憶反應(yīng)引起的抗體的上升是暫時(shí)性的,，短時(shí)間內(nèi)即很快下降,。
蛋白質(zhì)與多肽的：
多肽：通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽，它們的分子量低于10,，000Da（Dalton,，道爾頓），能透過半透膜,，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀,。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）；10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽,；由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),。
蛋白質(zhì)：生物體中廣泛存在的一類生物大分子，由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈,，經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的,、有活性的大分子。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈,，再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物,。
就是：都是由20種基本氨基酸通過肽鍵連接而成的。
多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別：
　　蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡(jiǎn)寫為：C,、H,、O、N等元素→氨基酸→多肽（肽鏈）→蛋白質(zhì),。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個(gè)層次,，區(qū)別如下：
　　①多肽和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異,。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級(jí)結(jié)構(gòu)形式,，而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的,，一個(gè)蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成（如高等動(dòng)物的細(xì)胞色素c是由104個(gè)氨基酸殘基的一條肽鏈組成）,，也可由多條肽鏈通過一定的化學(xué)鍵（肯定不是肽鍵，如二硫鍵,、氫鍵等）連接而成（如胰島素由2條肽鏈組成,、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等）,。
　?、诙嚯呐c蛋白質(zhì)的功能有差異。多肽往往是無(wú)生物活性,，而蛋白質(zhì)是具有生物活性的,。多肽一般無(wú)活性（如蛋白質(zhì)在胃、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽）,，少數(shù)有活性（如抗利尿激素就是多肽類激素）,，與蛋白質(zhì)相比，多肽的分子量較小,，沒有空間結(jié)構(gòu),，一般無(wú)活性；蛋白質(zhì)的分子量較大,，有空間結(jié)構(gòu),，有活性（變性后活性下降或消失，活性消失叫做失活）
　　因此,，一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實(shí)際上不能稱為蛋白質(zhì),。
多肽合成：
是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過程，固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成,。過去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法,。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來(lái)，經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善,，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù),，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn)，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度,。多肽合成總的來(lái)說分成兩種：固相合成和液相多肽合成,。