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O/F培養(yǎng)基（HLGB）

食品衛(wèi)生檢驗(yàn)培養(yǎng)基

250g

用于鑒別弧菌葡萄糖代謝類型（發(fā)酵型或氧化型）（SN標(biāo)準(zhǔn)）

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相關(guān)知識(shí)>>>>>

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟：
　　1,、制備抗原。 　
　2,、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,。
　　3,、動(dòng)物免疫。 　
　4,、試取血進(jìn)行測(cè)試,，看看是否成功免疫。
　　5,、如果成功免疫,，殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采集全部血清,。
　　6,、純化出抗體。 　
　7,、鑒定抗體,。包括純度以及特異性。
　　抗體的特異性鑒定 ：
抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力,?？贵w的特異性高，它的識(shí)別能力就強(qiáng),。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示,。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線,，計(jì)算各自的結(jié)合率,，求出各自在 IC50時(shí)的濃度，并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率,。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,，而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時(shí)，表示 這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為 0,，即該血清的特異性較好,。
按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能分類：
　　按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能，可將其分為IgM,、IgG,、IgA、IgE,、IgD五類,。
　　IgM抗體是免疫應(yīng)答中首先分泌的抗體。它們?cè)谂c抗原結(jié)合后啟動(dòng)補(bǔ)體的級(jí)聯(lián)反應(yīng),。它們還把入侵者相互連接起來,，聚成一堆便于巨噬細(xì)胞的吞噬；
　 IgG抗體激活補(bǔ)體,，中和多種毒素,。IgG持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng),，是*能在母親妊娠期穿過胎盤保護(hù)胎兒的抗體。他們還從乳腺分泌進(jìn)入初乳,，使新生兒得到保護(hù),；
　　IgA抗體進(jìn)入身體的黏膜表面，包括呼吸,、消化,、生殖等管道的黏膜，中和感染因子,。還可以通過母乳的初乳把這種抗體輸送到新生兒的消化道黏膜中,，是在母乳中含量zui多，zui為重要的一類抗體,；
　　IgE抗體的尾部與嗜堿細(xì)胞,、肥大細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)合。當(dāng)抗體與抗原結(jié)合后,，嗜堿細(xì)胞與肥大細(xì)胞釋放組織胺一類物質(zhì)促進(jìn)炎癥的發(fā)展,。這也是引發(fā)速發(fā)型過敏反應(yīng)的抗體；
　　IgD抗體的作用還不太清楚,。它們主要出現(xiàn)在成熟的B淋巴細(xì)胞表面上,，可能與B細(xì)胞的分化有關(guān)。
（IgD于1995年從人骨髓瘤蛋白中發(fā)現(xiàn),，分子量為175kD，主要由扁桃體,、脾等處漿細(xì)胞產(chǎn)生,，人血清中IgD濃度為3～40μg/ml,不到血清總Ig的1%，在個(gè)體發(fā)育中合成較晚,。IgD鉸鏈區(qū)很長(zhǎng),，且對(duì)蛋白酶水解敏感，因此IgD半衰期很短,，僅2.8天,。血清中IgD確切的免疫功能尚不清楚。在B細(xì)胞分化到成熟B細(xì)胞階段,，除了表達(dá)SmIgD,，抗原刺激后表現(xiàn)為免疫耐受。成熟B細(xì)胞活化后或者活化后或者變成記憶B細(xì)胞時(shí),，SmIgD逐漸消失,。）
生物活性：
　　（1）特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞,，通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁(yè)p傷,。然而,，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用,。 　
?。?）激活補(bǔ)體：IgM、IgG1,、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體,，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補(bǔ)體,。
　?。?）結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞,，產(chǎn)生不同的疚,，參與免疫應(yīng)答。
　?。?）可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中,，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A（IgA）可通過消化道及呼吸道粘膜,，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素,。
　　（5）具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì),，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能,。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性,。
　?。?）抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞,。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀,。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,，再經(jīng)透析法將其純化,。
　　（7）通過與細(xì)胞Fc受體結(jié)合發(fā)揮多種生物效應(yīng) 　?、僬{(diào)理作用 　　IgG,、IgM的Fc段與吞噬細(xì)胞表面的FcγR、FcμR結(jié)合,，增強(qiáng)其吞噬能力,，通常將抗體促進(jìn)吞噬細(xì)胞吞噬功能的作用稱為抗體的調(diào)理作用 （opsonization）,。 　　②發(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用,。
蛋白質(zhì)與多肽的：
多肽：通常由10~100氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,，它們的分子量低于10，000Da（Dalton,，道爾頓）,，能透過半透膜，不被三氯乙酸及硫酸銨所沉淀,。也有文獻(xiàn)把由2~10個(gè)氨基酸組成的肽稱為寡肽（小分子肽）,；10~50個(gè)氨基酸組成的肽稱為多肽；由50個(gè)以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),。
蛋白質(zhì)：生物體中廣泛存在的一類生物大分子,，由核酸編碼的α氨基酸之間通過α氨基和α羧基形成的肽鍵連接而成的肽鏈，經(jīng)翻譯后加工而生成的具有特定立體結(jié)構(gòu)的,、有活性的大分子,。是α—氨基酸按一定順序結(jié)合形成一條多肽鏈，再由一條或一條以上的多肽鏈按照其特定方式結(jié)合合而成的高分子化合物,。
就是：都是由20種基本氨基酸通過肽鍵連接而成的,。
多肽與蛋白質(zhì)的區(qū)別：
　　蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)層次可簡(jiǎn)寫為：C、H,、O,、N等元素→氨基酸→多肽（肽鏈）→蛋白質(zhì)。多肽與蛋白質(zhì)是不同的兩個(gè)層次,，區(qū)別如下：
　?、俣嚯暮偷鞍踪|(zhì)的結(jié)構(gòu)有差異。多肽僅僅是蛋白質(zhì)的初級(jí)結(jié)構(gòu)形式,，而蛋白質(zhì)具有一定的空間結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)是由多肽和其他物質(zhì)結(jié)合而成的,，一個(gè)蛋白質(zhì)分子可由一條肽鏈組成（如高等動(dòng)物的細(xì)胞色素c是由104個(gè)氨基酸殘基的一條肽鏈組成）,，也可由多條肽鏈通過一定的化學(xué)鍵（肯定不是肽鍵，如二硫鍵,、氫鍵等）連接而成（如胰島素由2條肽鏈組成,、胰凝乳蛋白酶是由3條肽鏈組成、血紅蛋白分子由4條肽鏈組成,、免疫球蛋白分子由4條肽鏈組成等）,。
　　②多肽與蛋白質(zhì)的功能有差異,。多肽往往是無生物活性,，而蛋白質(zhì)是具有生物活性的,。多肽一般無活性（如蛋白質(zhì)在胃、小腸中經(jīng)消化產(chǎn)生的多肽）,，少數(shù)有活性（如抗利尿激素就是多肽類激素）,，與蛋白質(zhì)相比，多肽的分子量較小,，沒有空間結(jié)構(gòu),，一般無活性；蛋白質(zhì)的分子量較大,，有空間結(jié)構(gòu),，有活性（變性后活性下降或消失，活性消失叫做失活）
　　因此,，一條剛從核糖體中合成的多肽鏈實(shí)際上不能稱為蛋白質(zhì),。
多肽合成：
是一個(gè)重復(fù)添加氨基酸的過程，固相合成順序一般從C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成,。過去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法,。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來，經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善,，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù),，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn)，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度,。多肽合成總的來說分成兩種：固相合成和液相多肽合成,。