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小鼠25羥基維生素D3（25（OH）D3/25 HVD3）ELISA試劑盒

Mouse 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit

包裝：96T/48T
檢測標(biāo)本：包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等。
保存：2-8℃,，一年,。

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小鼠25羥基維生素D3（25（OH）D3/25 HVD3）ELISA試劑盒供應(yīng)商：

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相關(guān)知識>>>>>>>
安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝,、抽煙或使用化妝品,。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作步驟
1． 使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí)。
4． 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
7． 每孔加入底物A,、B各50ul，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度,。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。
操作注意事項(xiàng)
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時(shí),，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時(shí)間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。
樣品收集、處理及保存方法
1,、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3,、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。