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上海博耀生物科技有限公司

主營產(chǎn)品： elisa試劑盒,一抗,二抗,，抗體,ABI

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聯(lián)系人：
王羽
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上海市閔行區(qū)景聯(lián)路439號
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shkmsw.biomart.cn/
商鋪：
http://sorrent.com.cn/st179893/
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人晚期氧化蛋白產(chǎn)物（AOPP）定量檢測試劑盒（ELISA）

2012-11-26　閱讀(1821)

 

僅供科研使用,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。
使用前仔細(xì)閱讀本說明書,。
 
用    途：用于定量檢測人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中晚期氧化蛋白產(chǎn)物（AOPP）的含量。
工作原理
本試劑盒采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,，測定樣品中人晚期氧化蛋白產(chǎn)物（AOPP）的水平,。向預(yù)先包被人晚期氧化蛋白產(chǎn)物（AOPP）抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和HRP標(biāo)記的晚期氧化蛋白產(chǎn)物（AOPP）抗體，經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的組分,，然后再加入底物A、B,，產(chǎn)生藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人晚期氧化蛋白產(chǎn)物（AOPP）的濃度呈正相關(guān),。
試劑盒組成

1
標(biāo)準(zhǔn)品（400ng/ml）
0.5ml
7
顯色劑A液
6ml
2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6mL
8
顯色劑B液
6ml
3
酶標(biāo)包被板
12孔×8條
9
終止液
6ml
4
酶標(biāo)試劑
6ml
10
說明書
1份
5
20×濃縮洗滌液
20ml
11
封板膜
2張
6
樣品稀釋液
6ml
12
密封袋
1個

注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：400,、200、100,、50,、25、0 ng/ml
需要而未提供的試劑和器材
1． 37℃恒溫箱,。
2． 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀,。
3． 精密移液器及一次性吸頭
4． 蒸餾水，
5． 一次性試管
6． 吸水紙
注意事項(xiàng)
1． 從2-8℃取出的試劑盒,，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘,。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差
3． 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本都做雙份檢測。
4． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
5． 為避免交叉污染,，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
7． 底物B對光敏感,，避免長時(shí)間暴露于光下,。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要,，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中
 
標(biāo)本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作程序
1． 分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。輕輕晃動混勻,，37℃溫育60分鐘。
2． 棄去液體,，甩干,，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,，拍干,。
3． 每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
4． 取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
5． 測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）,。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
6． 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度,。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算,。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)：
準(zhǔn)備試劑,，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
 


 

加入準(zhǔn)備好的樣品,、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘
 
洗板5次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色15分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD值
 
計(jì)算
 
檢測范圍：6.25 ng/ml -400ng/ml,。
規(guī)格：    96T/盒
保存：    2-8℃
有效期： 6個月（2-8℃）,。
 


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