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Annexin V-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間:2024-12-24 08:36:34瀏覽次數(shù):1333次

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Annexin V-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(膜聯(lián)蛋白A5-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒)(胎盤抗凝蛋白-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒)

凱基Annexin V-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
Annexin V-PE  Apoptosis Detection Kit
Cat numberKGA             For Research Use Only
Store at4 for one year
Expire date

一,、試劑盒說明
在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),,而在細(xì)胞凋亡早期,,細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種分子量為35~36kDCa2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,,故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一,。將Annexin V進(jìn)行熒光素PE標(biāo)記,,以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生,。可與7-AAD聯(lián)合使用,。
本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測(cè)(不*用于檢測(cè)組織樣本)。
二,、試劑盒組份
組份
Cat: KGA1011
10 assays
Cat: KGA1012
20 assays
Cat: KGA1013
50 assays
Cat: KGA1014
100 assays
儲(chǔ)存條件
AnnexinV-PE
10μL
20μL
50μL
100μL
4避光
Binding Buffer
5 mL
10.0 mL
25 mL
50 mL
4
三,、試劑盒以外自備儀器和試劑
流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡、低速離心機(jī),、微量移液器
1.5m L Microtube,、載玻片、蓋玻片(熒光顯微鏡觀察需用),、PBS,、不含EDTA的胰酶消化液
四、使用注意事項(xiàng)
1.   微量試劑取用前請(qǐng)離心集液,。
2. Annexin V-PE避光保存及使用,。
3. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),,細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,,,,不*用于檢測(cè)組織樣本。
4. *使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,。如果是貼壁細(xì)胞,,建議適用不含EDTA的胰酶消化,如消化不當(dāng),,可能引起假陽(yáng)性,,而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán),而影響檢測(cè),??蓪⒁让赶蠹?xì)胞的保存在含2%BSAPBS中,防止進(jìn)一步的損傷,。
5. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅,,請(qǐng)不要固定樣品。
6.   因檢測(cè)細(xì)胞的類型,、凋亡誘導(dǎo)劑種類,、使用的檢測(cè)儀器不同,因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同,,因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照,,進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
五,、操作方法
1.   懸浮細(xì)胞離心(2000rpm離心5min)收集,;貼壁細(xì)胞用不含EDTA的胰酶消化收集(注:胰酶消化時(shí)間不易過長(zhǎng),否則容易引起假陽(yáng)性),;
2.   PBS洗滌細(xì)胞二次(2000rpm離心5min)收集1~5×105細(xì)胞,;
3.   加入500μLBinding Buffer懸浮細(xì)胞;
4.   加入1μL Annexin V-PE混勻,;
5.   室溫,、避光、反應(yīng)515min,;
6.   請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),,進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A. 熒光顯微鏡觀察
1.   滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,,并用蓋玻片蓋上細(xì)胞,;
2.   對(duì)于貼壁細(xì)胞來說,也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,;
(1)         將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),,用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,并設(shè)立陰性對(duì)照組,;
(2)         PBS洗滌細(xì)胞兩次,;
(3)         500μL Binding Buffer中加入1μL Annexin V-PE混勻,;
(4)         將上述溶液滴加于蓋玻片表面,使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋,;
(5)         避光,、室溫反應(yīng)5 min,。
3.   將蓋玻片倒置于載玻片上,,于熒光顯微鏡下濾光片(羅丹明)觀察
Annexin V-PE熒光信號(hào)呈橙紅色。
B.  流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),,激發(fā)波長(zhǎng)Ex=488 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=578 nm,。
Annexin V-PE的橙紅色熒光建議使用FL2通道檢測(cè)。
熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié):使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的正常細(xì)胞,,作為對(duì)照進(jìn)行熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。

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