Annexin V-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（膜聯(lián)蛋白A5-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒）（胎盤抗凝蛋白-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒）
凱基Annexin V-PE細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
（Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit）
Cat number：KGA For Research Use Only
Store at4℃ for one year
Expire date：
一,、試劑盒說明
在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),，而在細(xì)胞凋亡早期,，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一,。將Annexin V進(jìn)行熒光素PE標(biāo)記,，以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生,。可與7-AAD聯(lián)合使用,。
本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測(cè)（不*用于檢測(cè)組織樣本）。
二,、試劑盒組份
| 組份 | Cat: KGA1011 10 assays | Cat: KGA1012 20 assays | Cat: KGA1013 50 assays | Cat: KGA1014 100 assays | 儲(chǔ)存條件 |
| AnnexinV-PE | 10μL | 20μL | 50μL | 100μL | 4℃避光 |
| Binding Buffer | 5 mL | 10.0 mL | 25 mL | 50 mL | 4℃ |
三,、試劑盒以外自備儀器和試劑
流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡、低速離心機(jī),、微量移液器
1.5m L Microtube,、載玻片、蓋玻片（熒光顯微鏡觀察需用）,、PBS,、不含EDTA的胰酶消化液
四、使用注意事項(xiàng)
1． 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液,。
2． Annexin V-PE避光保存及使用,。
3． 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105,，,，不*用于檢測(cè)組織樣本。
4． *使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,。如果是貼壁細(xì)胞,，建議適用不含EDTA的胰酶消化，如消化不當(dāng),，可能引起假陽(yáng)性,，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè),?？蓪⒁让赶蠹?xì)胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止進(jìn)一步的損傷,。
5． 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅,，請(qǐng)不要固定樣品。
6． 因檢測(cè)細(xì)胞的類型,、凋亡誘導(dǎo)劑種類,、使用的檢測(cè)儀器不同，因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同,，因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照,，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
五,、操作方法
1． 懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集,；貼壁細(xì)胞用不含EDTA的胰酶消化收集（注：胰酶消化時(shí)間不易過長(zhǎng)，否則容易引起假陽(yáng)性）,；
2． 用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞,；
3． 加入500μL的Binding Buffer懸浮細(xì)胞；
4． 加入1μL Annexin V-PE混勻,；
5． 室溫,、避光、反應(yīng)5～15min,；
6． 請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi),，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
A． 熒光顯微鏡觀察
1． 滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上,，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞,；
2． 對(duì)于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,；
（1） 將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng),，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組,；
（2） 用PBS洗滌細(xì)胞兩次,；
（3） 在500μL 的Binding Buffer中加入1μL Annexin V-PE混勻,；
（4） 將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋,；
（5） 避光,、室溫反應(yīng)5 min,。
3． 將蓋玻片倒置于載玻片上,，于熒光顯微鏡下濾光片（羅丹明）觀察
Annexin V-PE熒光信號(hào)呈橙紅色。
B． 流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè),，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=488 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=578 nm,。
Annexin V-PE的橙紅色熒光建議使用FL2通道檢測(cè)。
熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)：使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的正常細(xì)胞,，作為對(duì)照進(jìn)行熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置,。
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