PI染色試劑盒
細(xì)胞凋亡PI染色試劑盒
（Cell Apoptosis PI Detection Kit）
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一、試劑盒說明
熒光標(biāo)記是研究細(xì)胞凋亡的zui基本方法。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化及生化學(xué)變化都可以通過熒光標(biāo)記的的方法而檢測出來,，從而區(qū)別鑒別出正常細(xì)胞,、凋亡細(xì)胞、壞死細(xì)胞以及不同凋亡時期或細(xì)胞周期,。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種DNA結(jié)合性染料，其激發(fā)和發(fā)射波長分別為536nm和617nm,，產(chǎn)生紅色熒光,，但無膜通透性，不能透過活細(xì)胞膜,，只能染死細(xì)胞,。因此，在熒光顯微鏡下觀察,，正常細(xì)胞不能著色,，早期凋亡細(xì)胞呈微弱紅光，晚期凋亡細(xì)胞紅光加強,，壞死細(xì)胞呈強紅色熒光,。采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期時，凋亡細(xì)胞因內(nèi)源性核酸酶被激活,，使DNA廣泛降解,、斷裂，DNA結(jié)構(gòu)發(fā)生劇變,，隨著凋亡的進程,，DNA斷裂產(chǎn)生的小分子量DNA溢出胞外，細(xì)胞總DNA量降低,，于正常G0/G1細(xì)胞群前出現(xiàn)一DNA低染細(xì)胞群,，即G1峰前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G1）或稱A0細(xì)胞群，即凋亡細(xì)胞群,。用本試劑盒的PI直接對細(xì)胞DNA染色后,，進行流式細(xì)胞儀分析，即可檢測到凋亡細(xì)胞DNA的變化,。
二,、試劑盒組份
| 組分 | KGA214（100 assays） | 儲存條件 |
| Propidium Iodide, PI染液 | 500μL | 4℃，避光 |
| 10×Buffer A | 10 mL | 4℃ |
注: 1×Buffer A配制：用前用雙蒸水將10×Buffer A稀釋10倍,。
三,、試劑盒儀器和試劑
熒光顯微鏡、低速離心機,、微量移液器,、1.5m L Microtube、載玻片,、蓋玻片,、
流式細(xì)胞儀,、70%乙醇、RNase A
四,、用注意事項
Propidium Iodide （PI）有毒,，操作時要戴手套，需避光,。
五,、操作方法
1．熒光顯微鏡觀察
（1）收集細(xì)胞，1×Buffer A洗滌細(xì)胞一次（離心2000rpm,，5min）,，加適量的
1×Buffer A重懸細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度約為106/mL,；
（2）取95ul細(xì)胞懸液,，加入5 μL PI染液，輕輕混勻,；
（3）室溫避光放置5 min后,，滴加于載玻片上，加蓋玻片,；
（4）熒光顯微鏡,，激發(fā)和發(fā)射波長分別為536nm和617nm，綠光*BG12濾光鏡觀察,，拍照,。
2．流式細(xì)胞儀分析
（1）用1×Buffer A洗滌細(xì)胞一次（離心2000rpm，5min）,，收集并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106/mL,；
（2）細(xì)胞加9倍體積的70%乙醇,于-20℃固定至少12小時；
（3） 離心收集細(xì)胞后,，用1×Buffer A洗細(xì)胞除去乙醇,細(xì)胞重懸于500 μLBuffer A中,；
（4）加入RNase A（用戶自備），使其終濃度為0.25mg/ml, 37℃,反應(yīng)30min,；
（5）加入5μLPI室溫避光染色30分鐘,；
（6）流式細(xì)胞儀或熒光光度計激發(fā)波長488nm檢測。
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