人小腸平滑肌細(xì)胞采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，人小腸平滑肌細(xì)胞分離自小腸組織；小腸位于腹中,，上端接幽門與胃相通,，下端通過闌門與大腸相連，是食物消化吸收的主要場(chǎng)所,。小腸盤曲于腹腔內(nèi),，上連胃幽門，下接盲腸,，分為十二指腸,、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的,，因?yàn)槭澄锝?jīng)過小腸內(nèi)胰液,、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運(yùn)動(dòng)的機(jī)械性消化后，基本上完成了消化過程,，同時(shí)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了,。小腸管壁由粘膜、粘膜下層,、肌層和漿膜構(gòu)成,。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是管壁有環(huán)形皺襞，粘膜有許多絨毛，絨毛根部的上皮下陷至固有層,，形成管狀的腸腺,，其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切,；構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞,、杯狀細(xì)胞、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞,。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似,，接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似，絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短,，不形成紋狀緣,。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運(yùn)動(dòng)功能,，其中以吸收和分泌功能為主,。平滑肌細(xì)胞的收縮是負(fù)責(zé)腸蠕動(dòng)的動(dòng)力，促使食物向下運(yùn)動(dòng),。小腸平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,，核卵圓形,、居中；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),，高低起伏,；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí),，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。小腸平滑肌肉瘤是起源于小腸壁肌層、黏膜下肌層和腸壁血管平滑肌的惡性腫瘤,，是小腸結(jié)締組織惡性腫瘤中見的一種,。因此,，體外小腸平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)對(duì)研究小腸平滑肌肉瘤提供了基礎(chǔ)和前提。此外,，體外培養(yǎng)細(xì)胞,，由于影響因素較為單一，是研究細(xì)胞功能以及相應(yīng)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的基礎(chǔ),。

1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min,；倒置顯微鏡下觀察,，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化,；

3.用吸管輕輕吹打混勻,，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,，置于37℃,、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng),；

4.待細(xì)胞貼壁后,，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基,。

備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑,、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考

客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2,，我們隨時(shí)給予解答,。

1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月,。

2.在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,，請(qǐng)注意保持無菌操作。

3.傳代培養(yǎng)過程中,，消化時(shí)間不宜過長(zhǎng),，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,。