細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)常需要獲得單克隆，下面就給大家簡單介紹幾種方法：
方法一：單克隆細(xì)胞的培養(yǎng)就是這樣的,我現(xiàn)在作了15個96孔板的單克隆,總共才得到大約50株單克隆在做時(shí)候應(yīng)保證每個孔中的細(xì)胞是一個,因此,在200毫升的培養(yǎng)液中加入小于96個的細(xì)胞,這樣平均到每個孔中因該可以由滿意的結(jié)果培養(yǎng)SPC-A1（人肺癌細(xì)胞）,，轉(zhuǎn)染了EGFP，然后進(jìn)行了G418抗性篩選和96孔板單克隆篩選,，zui終獲得了成功,。
方法二：實(shí)驗(yàn)步驟大致為：預(yù)先對96孔板除*排之外的所有孔加含15%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液,，0.1ml/孔，并放于細(xì)胞培養(yǎng)箱中溫育,，然后胰酶消化穩(wěn)定表達(dá)GFP的細(xì)胞,，細(xì)胞液稀釋至密度為1000cell/ml的單細(xì)胞懸浮液，上述細(xì)胞液接種于96孔板的*排,，0.2ml/孔，從中吸取0.1ml細(xì)胞溶液接種于第二排,，混合后,，從第二排中吸取0.1ml接種于第三排……，一直到第八排,，zui后一排都丟棄0.1ml細(xì)胞液,。一般來說,，每一列都會有某個孔中只有1~2個細(xì)胞。
方法三：在顯微鏡下觀察,，標(biāo)記孔中小于10個細(xì)胞的孔,，然后在顯微鏡下用記號筆在皿底把單個熒光細(xì)胞圈住，然后在操凈臺里用滅過菌底牙簽將圈外的細(xì)胞戳死,，這樣留在孔中的就是單克隆了,，通過這樣的,，獲得了單克隆。但需注意的是：時(shí)間不能超過30min,，否則細(xì)胞極容易死亡,。
解決操作時(shí)間長的方法：拿一個96板，在里面隨便種一些細(xì)胞,，然后用牙簽練習(xí),，我練了5～6次后非常熟練了,。還有注意培養(yǎng)液：是含15％的胎牛血清，加大營養(yǎng),，有利于細(xì)胞生長,；另外一種方法是對還沒有變黃的細(xì)胞液進(jìn)行過濾,，過濾后的培養(yǎng)含有很多生長因子，可以作為單克隆的培養(yǎng)液,。
