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南京賽泓瑞生物科技有限公司

Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑| *!

時(shí)間:2014-10-17閱讀:149
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    南京賽泓瑞生物科技有限公司是專業(yè)從事生化試劑,、分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)耗材研發(fā),、銷售、服務(wù)為一體的專業(yè)性生物科技公司,。

  

Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染試劑|

現(xiàn)在向您隆重介紹一種可處理zui難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的通用型試劑。可憑借一種具有以下特性的試劑盒,,解放那些您真正關(guān)心的生物相關(guān)細(xì)胞類型:

  • 的性能——zui高的效率,適用于各種難以轉(zhuǎn)染的以及常見(jiàn)的細(xì)胞類型
  • 更高的細(xì)胞活性——對(duì)細(xì)胞作用溫和,毒性低
  • 功能多樣——適用于DNA,、RNA和共轉(zhuǎn)染
  •  

                         

 

 

在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞類型中具有廣泛的優(yōu)良性能 

Lipofectamine® 3000試劑充分利用了我們*的脂質(zhì)體納米顆粒技術(shù),實(shí)現(xiàn)了超高轉(zhuǎn)染性能和可重復(fù)的試驗(yàn)結(jié)果,。其可在zui廣泛的難轉(zhuǎn)染和通用細(xì)胞類型(圖1)中獲得非凡的轉(zhuǎn)染效率,同時(shí)提升細(xì)胞存活率,。



圖1. Lipofectamine® 3000試劑勝過(guò)了Lipofectamine® 2000和FuGENE® HD試劑,。每一種試劑均用于以96孔形式轉(zhuǎn)染EK 293,、HeLa、LNCaP,、HepG2和A549細(xì)胞系,并在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)分析GFP表達(dá)情況,。在所有五種細(xì)胞系中,,Lipofectamine® 3000都表現(xiàn)出了高于Lipofectamine® 2000和FuGENE® HD的GFP轉(zhuǎn)染效率,。

 

  圖2. 蛋白印跡分析顯示了HepG2細(xì)胞系中GST-STAT蛋白的表達(dá),。使用Lipofectamine® 2000試劑,、Lipofectamine® 3000試劑、FuGENE® HD試劑(競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品1)和X-tremeGENE® HP試劑(競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品2)將GST-STAT質(zhì)粒,,在24孔板內(nèi)轉(zhuǎn)染入細(xì)胞。在轉(zhuǎn)染后48小時(shí),,收集細(xì)胞并進(jìn)行蛋白印跡分析,。β-肌動(dòng)蛋白轉(zhuǎn)膜圖代表四種樣品上樣量相等。


更高細(xì)胞活性,,更低細(xì)胞毒性 

在開發(fā)Lipofectamine® 3000時(shí),,我們對(duì)轉(zhuǎn)染過(guò)程的四個(gè)步驟進(jìn)行了優(yōu)化,,同時(shí)結(jié)合了我們*的脂質(zhì)體納米顆粒技術(shù)。其所具有的超高轉(zhuǎn)染效率使得我們可以減少試劑劑量,,降低處理細(xì)胞時(shí)的潛在毒性風(fēng)險(xiǎn)。

  圖3. 采用劑量的每種試劑,,通過(guò)綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)載體,,以96孔形式轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞,。在轉(zhuǎn)染后48小時(shí),采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析,,以測(cè)定百分比形式的轉(zhuǎn)染效率以及GFP表達(dá)強(qiáng)度。相對(duì)于Lipofectamine® 2000試劑和Lipofectamine® LTX試劑,,Lipofectamine® 3000試劑表現(xiàn)出了更高的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)水平,。


表1. 在一系列細(xì)胞系的測(cè)試中,,Lipofectamine® 3000試劑獲得了超過(guò)Lipofectamine® 2000試劑的轉(zhuǎn)染效率。

  • 細(xì)胞系 #-C
  • 細(xì)胞系 D-J
  • 細(xì)胞系 K-P
  • 細(xì)胞系 R-Z
細(xì)胞類型 Lipofectamine® 3000試劑轉(zhuǎn)染效率 Lipofectamine® 3000相對(duì)于 Lipofectamine® 2000試劑蛋白表達(dá)水平提高倍數(shù)
3T3 4
4T1 2
A431 2
A549 3
ACHN 2
bEnd.3 9
BJ 3
BT-549 4
C2C12 3
C6 5
Caco-2 2
Caki-1 4
CHO-K1 1
CHO-S 1
COLO 205 4
COS-7 4

轉(zhuǎn)染效率 (%): <30%     30-50%    51-79%    >80% 


增強(qiáng)您的癌癥研究工作 

使用生物相關(guān)性的細(xì)胞系,可為您的研究課題提供相關(guān)性的答案,。Lipofectamine® 3000試劑適用于zui廣泛的細(xì)胞譜系且兼具較高的轉(zhuǎn)染效率,,使您可以非常靈活地在研究中應(yīng)用自己選擇的細(xì)胞,。在一系列提取自不同組織的癌癥細(xì)胞中,Lipofectamine® 3000表現(xiàn)出了明顯高于Lipofectamine® 2000試劑等*轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染性能,。采用Lipofectamine® 2000試劑時(shí),僅有25%的選定癌癥細(xì)胞系屬于易轉(zhuǎn)染(轉(zhuǎn)染效率超過(guò)50%)的細(xì)胞系,,而采用Lipofectamine® 3000試劑時(shí),,則有60%的細(xì)胞系屬于易轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。

表2. 在癌癥細(xì)胞系中,,Lipofectamine® 3000試劑獲得了超過(guò)Lipofectamine® 2000試劑的轉(zhuǎn)染效率,。

癌癥細(xì)胞系 Lipofectamine® 3000試劑轉(zhuǎn)染效率 Lipofectamine® 3000相對(duì)于 Lipofectamine® 2000試劑蛋白表達(dá)水平提高倍數(shù)
Hs 578.T 3
SW480 2
SK-MEL-28 2
4T1 2
RD 4
Saos-2 4
PANC-1 3
NCI-H23 2
BT-549 4
L6 8
SK-OV-3 3
DU 145 2
HCC1937 5
SW620 5
MDA-MB-468 9
NCI-H460 17
Caki-1 4

轉(zhuǎn)染效率 (%): <30%     30–50%    51–79%    >80%

 

  圖4. 用Lipofectamine® 2000試劑和Lipofectamine® 3000試劑將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)17種細(xì)胞系中,采用24孔形式(以0.5 ?g質(zhì)粒/孔的規(guī)格)和各試劑*的試驗(yàn)方案,。在轉(zhuǎn)染后48小時(shí),分析GFP表達(dá),。每種條件均進(jìn)行三次重復(fù)測(cè)試,,圖中的數(shù)據(jù)點(diǎn)為平均轉(zhuǎn)染效率 + 標(biāo)準(zhǔn)偏差。


改善基因組編輯結(jié)果 

開發(fā)Lipofectamine® 3000試劑,,旨在突破輸送技術(shù)的界限,促進(jìn)生物相關(guān)系統(tǒng)內(nèi)的新技術(shù)發(fā)展,,例如基因組編輯,。通過(guò)這一新試劑,,GeneArt® TAL和CRISPR可以靶向HepG2和U2OS細(xì)胞內(nèi)的AAVS1位點(diǎn),同時(shí)表現(xiàn)出更佳的轉(zhuǎn)染效率,、平均熒光強(qiáng)度和基因組切割效果,。這些改進(jìn)之處有助于zui大限度減少繁重的下游工作,更便于進(jìn)行干細(xì)胞處理,增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因在細(xì)胞基因組中的位點(diǎn)特異性插入,。

下載應(yīng)用說(shuō)明 >



圖5. GeneArt® TAL和CRISPR的切割效率,。TAL和CRISPR靶向(A) U2OS和(B) HepG2細(xì)胞系中的AAVS1位點(diǎn)。采用GeneArt®基因組切割檢測(cè)試劑盒分析切割效率,。 



圖6. 使用CRISPR載體時(shí)的轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)。該載體含有OFP報(bào)告基因,,并采用Lipofectamine® 2000或Lipofectamine® 3000轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染到(A) U2OS和(B) HepG2細(xì)胞系中,。柱狀圖所示為報(bào)告基因的表達(dá)。圖片所示為相應(yīng)細(xì)胞表達(dá)OFP的熒光圖,。

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