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JM109,,DH,BL21感受態(tài)有何區(qū)別

時間:2013-5-9閱讀:1194
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1:DH菌株
DH是一種常用于質(zhì)??寺〉木?。E.coli DH在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時,可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α-互補,??捎糜谒{(lán)白斑篩選鑒別重組菌株。

基因型:F-,,φ80dlacZΔM15,,Δ(lacZYA-argF)U169,,deoR,recA1,,endA1,,hsdR17(rk-,mk+),,phoA,,supE44,λ-,,thi-1,,gyrA96,relA1

2:BL21(DE3) 菌株

該菌株用于表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因,。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ 噬菌體DE3區(qū),,該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白,。

基因型:F-,,ompT, hsdS(rBB-mB-),,gal,, dcm(DE3)

3:BL21(DE3) pLysS菌株

該菌株含有質(zhì)粒pLysS,因此具有氯霉素抗性,。PLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因,,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾目的蛋白的表達(dá),。該菌適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白,。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),,gal,, dcm(DE3,pLysS ,,Camr

4:JM109菌株

該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化或用M13 phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染時,,由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進(jìn)行α-互補,從而顯示β-半乳糖苷酶活性,,由此很容易鑒別重組體菌株

基因型:recA1,,endA1,gyrA96,,thi-1,,hsdR17,supE44,,relA1,,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,,proAB+,lacIq,,lacZΔM15]

5:*0菌株

該菌株適用于的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。

基因型:F- ,,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),, φ80 ,lacZΔM15,,△lacⅩ74,, recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697,, galU ,galK ,,rps,, (Strr) endA1, nupG

6:HB101菌株

該菌株遺傳性能穩(wěn)定,,使用方便,,適用于各種基因重組實驗

基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),,recA13,,ara-14,proA2,,lacY1,,galK2,rpsL20,,xyl-5,,mtl-1,leuB6,,thi-1
 

M110或 SCS110

大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的*個胞嘧啶 C-5位置上引入甲基,。 常用的菌株都會產(chǎn)生dam,dcm,,從而受到甲基化的影響.

部分限制性內(nèi)切酶對甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,,一般生物公司提供的內(nèi)切酶說明中均有說明,。

大多數(shù)酶切位點的甲基化不影響切割,而有些會影響,,如XbaI, BclI等,。而且甲基化只發(fā)生在特定序列,,以XbaI為例,只有在位點序列旁出現(xiàn)GA或TC,,該XbaI位才會被甲基化,。

而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:
(1)選用上述酶的同功酶,如Sau3AI,,DNA識別切割位點與MboI相同,;但不受甲基化影響;

(2)利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行DNA的制備,,如E.coli JM110和鏈霉菌等,,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒有甲基化酶,,從這些細(xì)胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割,。

E.coli JM110
要排除dam,dcm甲基化的影響,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,,如JM110

如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒,,則不會被甲基化.

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