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JM109,DH,,BL21感受態(tài)有何區(qū)別

時間:2013-5-9閱讀:1132
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1:DH菌株
DH是一種常用于質(zhì)??寺〉木辍.coli DH在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時,,可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α-互補,。可用于藍白斑篩選鑒別重組菌株,。

基因型:F-,,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,,deoR,,recA1,,endA1,hsdR17(rk-,,mk+),,phoA,supE44,,λ-,,thi-1,gyrA96,,relA1

2:BL21(DE3) 菌株

該菌株用于表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因,。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ 噬菌體DE3區(qū),該區(qū)整合于BL21的染色體上,。該菌適合表達非毒性蛋白,。

基因型:F-,ompT,, hsdS(rBB-mB-),,gal, dcm(DE3)

3:BL21(DE3) pLysS菌株

該菌株含有質(zhì)粒pLysS,,因此具有氯霉素抗性,。PLysS含有表達T7溶菌酶的基因,能夠降低目的基因的背景表達水平,,但不干擾目的蛋白的表達,。該菌適合表達毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,,ompT hsdS(rBB-mB-),,gal, dcm(DE3,,pLysS ,,Camr

4:JM109菌株

該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進行DNA轉(zhuǎn)化或用M13 phage載體進行轉(zhuǎn)染時,由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進行α-互補,,從而顯示β-半乳糖苷酶活性,,由此很容易鑒別重組體菌株

基因型:recA1,endA1,,gyrA96,,thi-1,hsdR17,,supE44,,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,,proAB+,,lacIq,,lacZΔM15]

5:*0菌株

該菌株適用于的DNA克隆和質(zhì)粒擴增,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳,。

基因型:F- ,,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC), φ80 ,,lacZΔM15,,△lacⅩ74, recA1 ,,araΔ139Δ(ara-leu)7697,, galU ,galK ,,rps,, (Strr) endA1, nupG

6:HB101菌株

該菌株遺傳性能穩(wěn)定,,使用方便,,適用于各種基因重組實驗

基因型:supE44,,hsdS20(rB-mB-),,recA13,ara-14,,proA2,,lacY1,galK2,,rpsL20,,xyl-5,mtl-1,,leuB6,,thi-1
 

M110或 SCS110

大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,,后者在CCA/TGC序列的*個胞嘧啶 C-5位置上引入甲基,。 常用的菌株都會產(chǎn)生dam,dcm,從而受到甲基化的影響.

部分限制性內(nèi)切酶對甲基化的DNA不能切割,,如FbaI和MboI等,,一般生物公司提供的內(nèi)切酶說明中均有說明。

大多數(shù)酶切位點的甲基化不影響切割,,而有些會影響,,如XbaI, BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列,,以XbaI為例,,只有在位點序列旁出現(xiàn)GA或TC,,該XbaI位才會被甲基化。

而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:
(1)選用上述酶的同功酶,,如Sau3AI,,DNA識別切割位點與MboI相同;但不受甲基化影響,;

(2)利用甲基化酶缺失的受體細胞進行DNA的制備,,如E.coli JM110和鏈霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,,而后者細胞內(nèi)本就沒有甲基化酶,,從這些細胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。

E.coli JM110
要排除dam,dcm甲基化的影響,,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,,如JM110

如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒,則不會被甲基化.

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