（一）試劑準(zhǔn)備

1．TRIzol試劑。
　　2．氯仿
　　3．異丙醇
　　4．75%乙醇（DEPC H2O配制）
　　5．DEPC H2O

（二）操作步驟

1． 樣品處理：
　?。?）培養(yǎng)細(xì)胞：收獲細(xì)胞1-5×107,，移入1.5ml離心管中,，加入1ml Trizol，混勻,，室溫靜置5min,。
　　（2）組織：取50-100mg組織（新鮮或-70℃及液氮中保存的組織均可）置1.5ml離心管中,，加入1ml Trizol充分勻漿,，室溫靜置５min。
　　2．加入0.2ml氯仿,，振蕩15s,，靜置2min。
　　3．4℃離心,，12000g×15min,，取上清。
　　4．加入0.5ml異丙醇,，將管中液體輕輕混勻,，室溫靜置10min。
　　5．4℃離心,，12000g×10min,，棄上清。
　　6．加入1ml 75%乙醇,，輕輕洗滌沉淀,。4℃，7500g×5min,，棄上清,。
　　7. 晾干，加入適量的DEPC H2O溶解（65℃促溶10-15min）,。

（三）注意事項(xiàng)
　　1．樣品量和Trizol的加入量一定要按步驟（1）的比例,，不能隨意增加樣品量或減少Trizol量，否則會(huì)使內(nèi)源性RNase的抑制不*,，導(dǎo)致RNA降解,。
　　2．實(shí)驗(yàn)過程必須嚴(yán)格防止RNsae的污染。

二,、總RNA定量

RNA定量方法與DNA定量相似,。RNA在260nm波長處有zui大的吸收峰。因此,，可以用260nm波長分光測定RNA濃度,，OD值為1相當(dāng)于大約40μg/ml的單鏈RNA。如用1cm光徑,，用 ddH2O稀釋DNA樣品n倍并以ddH2O為空白對(duì)照,，根據(jù)此時(shí)讀出的OD260值即可計(jì)算出樣品稀釋前的濃度：
　　RNA（mg/ml）=40×OD260讀數(shù)×稀釋倍數(shù)（n）/1000

RNA純品的OD260/OD280的比值為2.0,，故根據(jù)OD260/OD280的比值可以估計(jì)RNA的純度。若比值較低,，說明有殘余蛋白質(zhì)存在,；比值太高，則提示RNA有降解,。