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中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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層析柱的使用

時(shí)間：2018-1-25閱讀：2080
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　　關(guān)于層析柱裝柱,、使用及相關(guān)注意事項(xiàng)
 
　　(1),、裝柱前要仔細(xì)看填料的使用說明書，每種填料都有自己的特性,，以及特殊的裝柱方法,，針對(duì)不同的空柱，也要注意方法可能不同,；
 
　　3,、這一點(diǎn)非常重要：裝柱包括以后使用中不允許柱內(nèi)進(jìn)入氣泡(bubble free)，柱頭事先也要排除氣泡,。
 
　　(2),、填料要加水?dāng)嚢璩删鶆驊乙海瑧乙簼舛纫捞盍隙煌?，一?0-85%,，迅速倒入空柱內(nèi)，或吸或壓,，流速和具體步驟看說明書,。
 
　　(3)、所有柱子盡量做到填料均勻,，尤其是用于凝膠層析的柱子,。裝柱完成后，可用柱效測(cè)定的方法檢查裝填效果。一個(gè)裝填合格的柱子的理論塔板高度應(yīng)是填料平均粒徑的2-4 倍,，在此范圍內(nèi)越小越好,。
 
　　(4)、選擇合適的泵,，首先是流速滿足要求,，脈沖盡量小。柱塞泵,。
 
　　(5),、準(zhǔn)備上柱的液體應(yīng)進(jìn)行過濾，至少是0.45micrometre,。
 
　　(6),、關(guān)于純化，首先要考慮的是你的目標(biāo)：純度,、數(shù)量,、速度、收率等等,，再根據(jù)樣品的具體情況,，尤其是目標(biāo)蛋白的性質(zhì)，確定純化策略,。通常三步曲：capture,、purification、polishing,。*步先從大量或復(fù)雜樣品中將目標(biāo)蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;,，與主要雜質(zhì)分離；再用高選擇性的層析去除絕大部分雜質(zhì),；zui后精細(xì)純化,，提供純度至設(shè)定目標(biāo)。到實(shí)際工作中,，不要死靠三步,，也許一步也許四步或更多，具體情況具體分析,。所謂%26ldquo;三步%26rdquo;只是一種思路而已,。
 
　　(7)、至于測(cè)序,，我想大概不到1mg 應(yīng)該足夠了,。

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