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如何利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期
首先我們這邊先來看下這樣的問題：新消化獲得的細(xì)胞直接染色立馬上機(jī)檢測,，這一步是不是必須的？RnaseA的作用包不包括去處胞內(nèi)的雙鏈RNA,？是的話,，RnaseA能直接穿膜嗎？不是的話,，胞內(nèi)的雙鏈RNA不管了,？陰參的設(shè)定是不是健康成人外周血的淋巴細(xì)胞就可以了？
根據(jù)這樣的染色方法而定,，原理都是先打孔再染色,，因?yàn)镻I沒有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上?，F(xiàn)在基本有兩種方法,，一種就是乙醇固定。70-75%濃度效果都差不多,，優(yōu)點(diǎn)是作用比較輕柔,，可長時(shí)間固定，一般一個(gè)月都沒問題,，更長時(shí)間我沒試過,。適用于不能預(yù)計(jì)上機(jī)時(shí)間的朋友，可以先固定好幾批細(xì)胞然后再一起染色上機(jī),。缺點(diǎn)就是打孔時(shí)間較長,，至少過夜才能保證打孔效果,。
根據(jù)這樣的染色方法而定,，原理都是先打孔再染色,，因?yàn)镻I沒有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上?，F(xiàn)在基本有兩種方法,，一種就是乙醇固定。70-75%濃度效果都差不多,，優(yōu)點(diǎn)是作用比較輕柔,，可長時(shí)間固定，一般一個(gè)月都沒問題,，更長時(shí)間我沒試過,。適用于不能預(yù)計(jì)上機(jī)時(shí)間的朋友，可以先固定好幾批細(xì)胞然后再一起染色上機(jī),。缺點(diǎn)就是打孔時(shí)間較長,，至少過夜才能保證打孔效果,。
另一種就是用Triton打孔，這種方法比較激烈,。優(yōu)點(diǎn)是速度快,，消化以后可以馬上打孔染色上機(jī)，而且不使膜蛋白變性,，不容易造成粘連,。缺點(diǎn)就是不能長時(shí)間保存樣品，一般好半個(gè)小時(shí)內(nèi)檢測,，不然時(shí)間越久細(xì)胞DNA含量的離散度越高,，圖像越難看。不過現(xiàn)在很多廠家的試劑盒都是用這種快速打孔的方式,。
膜通透性改變以后酶可以進(jìn)去,。