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流式細(xì)胞儀原理
生物實(shí)驗(yàn)中的封閉劑
流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)總結(jié):內(nèi)容包括流式細(xì)胞儀 流程,、原理,、各種類型的樣本操作、樣本準(zhǔn)備,,以同型對照的理解,,及不同情況下如何使用封閉劑等。是本人相當(dāng)一段時(shí)間來的收集以及修正的內(nèi)容。
流式細(xì)胞儀(FCM)是八十年代集單克隆抗體,、熒光化學(xué),、激光、計(jì)算機(jī)等高技術(shù)發(fā)展起來的一種先進(jìn)儀器,,已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué) ,、生物化學(xué)、生物學(xué),、腫瘤學(xué)以及血液學(xué)等方面的研究和臨床常規(guī)工作,。其中檢測人白細(xì)胞表面標(biāo)志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷,,對淋巴細(xì)胞群和亞群進(jìn)行分類,,還能分離純化某一群或亞群細(xì)胞?;罴?xì)胞免疫熒光技術(shù)是用于FCM檢測的標(biāo)本準(zhǔn)備,,染色后也能在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察,在某些實(shí)驗(yàn)條件下,,活細(xì)胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優(yōu)于滴片固定的常規(guī)間接免疫熒光的結(jié)果,。
(一) 原理
活細(xì)胞表面保留有較完整的抗原 或受體,先用特異性鼠源性單克隆抗體與細(xì)胞表面相應(yīng)抗原結(jié)合,,再用熒光標(biāo)記的第二抗體結(jié)合,,根據(jù)所測定的熒光強(qiáng)度和陽性百分率即可知相應(yīng)抗原的密度和分布。