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凱氏定氮儀實(shí)驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)
定氮蒸餾器以凱氏定氮法測定氮含量換算蛋白質(zhì)的方法,，是上通用的標(biāo)準(zhǔn)方法，操作簡單,，測定結(jié)果重復(fù)性和重現(xiàn)性都很好,，廣泛用于各種食品,、谷物,、飼料等樣品的蛋白質(zhì)含量測定,。
(1)樣品應(yīng)是均勻的。固體樣品應(yīng)預(yù)先研細(xì)混勻,，液體樣品應(yīng)振搖或攪拌均勻,。
固體樣品般取樣范圍為0.20g~2.00g;半固體試樣般取樣范圍為2.00g~5.00g;液體樣品取樣10.0mL~25.0mL(約相當(dāng)?shù)?0mg~40mg)。若檢測液體樣品,，結(jié)果以g/100mL表示,。
樣品應(yīng)是均勻的。固體樣品應(yīng)預(yù)先研細(xì)混勻,，液體樣品應(yīng)振搖或攪拌均勻,。
(2)樣品放入定氮瓶內(nèi)時，不要沾附頸上,。萬沾附可用少量水沖下,，以免被檢樣消化不*，結(jié)果偏低,，或者用濾紙包裹好起投入消化，濾紙影響通過空白扣除,。消化時應(yīng)注意旋轉(zhuǎn)凱氏燒瓶,，將附在瓶壁上的碳粒沖下，對樣品*消化,。若樣品不易消化澄清透明,，可將燒瓶中溶液冷卻,，加入數(shù)滴過氧化氫后，再繼續(xù)加熱消化*,。
(3)定氮蒸餾器中樣品消化時,，不要用強(qiáng)火。若樣品含糖高或含脂及較多時,，注意控制加熱溫度,，以免大量泡沫噴出燒瓶，造成樣品損失,?？杉尤肷倭啃链蓟蛞后w石蠟，或硅消泡劑減少泡沫產(chǎn)生,。在整個消化過程中保持和緩的沸騰,，使火力集中在凱氏瓶底部，以免附在壁上的蛋白質(zhì)在無硫酸存在的情況下,，使氮有損失,。喬躍電子消解爐能夠很好的解決此問題。
(4)如硫酸缺少,，過多的硫酸鉀會引起氨的損失,，這樣會形成硫酸氫鉀，而不與氨作用,。因此,，當(dāng)硫酸過多的被消耗或樣品中脂肪含量過高時，要增加硫酸的量;加入硫酸鉀的作用為增加溶液的沸點(diǎn);催化劑硫酸銅在有機(jī)物全部消化后,，溶液顯清澈透明的藍(lán)綠色,，可用它來指示消化終點(diǎn)。此外,，硫酸銅還可用做下步蒸餾時堿性反應(yīng)的指示劑,。過氧化氫，為氧化劑,，有助于有機(jī)物消化,，同時可以消除消化過程中的氣泡現(xiàn)象。
(5)定氮蒸餾器的蒸餾瓶中在加入濃堿時,，往往出現(xiàn)褐色沉淀物,，這是由于分解促進(jìn)堿與加入的硫酸銅反應(yīng)，生成氫氧化銅,，經(jīng)加熱后又分解生成氧化銅的沉淀,。有時銅離子與氨作用，生成深蘭色的結(jié)合物2，加入氫氧化鈉是否足量,常常影響整個測定的順利進(jìn)行,。由反應(yīng)原理可知,，當(dāng)氫氧化鈉足量時有黑色氧化銅生成而使溶液呈淡黑色;當(dāng)氫氧化鈉量不足時就無黑色氧化銅產(chǎn)生而使溶液呈淡藍(lán)色，所以有無氧化銅顏色存在是判斷氫氧化鈉是否足量的標(biāo)志,。
(6)因蒸餾時反應(yīng)室的壓力大于大氣壓力,，故可將氨帶出。所以,，蒸餾時,，蒸氣要發(fā)生均勻，充足,，蒸餾中不得?；饠鄽猓駝t,，會發(fā)生倒吸,。停止蒸餾時，由于反應(yīng)室外層的壓力突然降低,，可使液體倒吸入反應(yīng)室外層,，所以，操作時,，應(yīng)先將冷凝管下端提高液面并清洗管口,，再蒸分鐘后關(guān)掉熱源。蒸餾是否*,，可用精密PH試紙測冷凝管口的冷凝液來測定,，中性則說明已蒸餾*。般情況下建議使用半微量法,，因?yàn)槿绻麴s失敗的話,，半微量法還可繼續(xù)蒸餾，而常量法只好全部重來,，費(fèi)時費(fèi)力,。我們使用喬躍經(jīng)過多次蒸餾吸收實(shí)驗(yàn)達(dá)到理想效果。
(7)混合指示劑在堿性溶液中呈綠色,，在中性溶液中呈灰色,，在酸性溶液中呈紅色。如果沒有溴甲酚綠,，可單獨(dú)使用0.1%甲基紅乙醇溶液,。
(8)吸收液也可以用0.01當(dāng)量的酸代表硼酸，過剩的酸液用0.01N堿液滴定,，而以硼酸為氨的吸收液,，可省去標(biāo)定堿液的操作，且硼酸的體積要求并不嚴(yán)格，亦可免去用移液管,，操作比較簡便。另外,，硼酸吸收液的溫度不應(yīng)超過40℃,，否則氨吸收減弱，造成檢測結(jié)果偏低,?？砂呀邮掌恐糜诶渌≈小?br />(9)在鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制時,，必須將基準(zhǔn)無水碳酸鈉于270-300℃灼燒恒重后稱取所須用量,，否則也會影響蛋白質(zhì)測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,，常量法中取0.1M比較合適,，半微量法中則在0.02～0.05M之間比較合適。