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Mynox® 支原體去除試劑

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  • 上海起發(fā)實驗試劑有限公司
  • 2024-08-29 13:24:01
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【簡單介紹】

Mynox是目前*可殺滅支原體的生物制劑
有效去除細胞培養(yǎng)及病毒保存中支原體的污染

【詳細說明】

產(chǎn)品說明：
    Mynox是目前*可殺滅支原體的生物制劑
    有效去除細胞培養(yǎng)及病毒保存中支原體的污染
規(guī)格：2次,，5次,，10次

特點：
  • *殺死支原體
    Mynox是*種也是*的以殺死支原體來去除污染的生物試劑。它取自枯草桿菌發(fā)酵以后的提取物，基于生物物理原理，特異性的與支原體膜結合，使其通透性改變,，導致支原體迅速死亡。
  • 對細胞無害
    Mynox不會與細胞膜結合,，故細胞毒性極低,。
  • 高效
    實驗證實，Mynox在三小時左右即可*的去除支原體,。
  • 非抗生素
    無耐藥菌株的產(chǎn)生

支原體去除試劑Mynox使用常見問題   Mynox說明書

相關文獻：Mynox文獻
所屬公司：德國Minerva Biolabs公司產(chǎn)品
所屬類別：支原體檢測,、去除,、預防試劑

 

Mynox® 支原體去除試劑  
1.      試劑及材料
1.1 試劑盒組分
操作手冊
Mynox試劑：無菌、即用型溶液（PBS緩沖液）,，PH 7.4,，220 µl/管
Cat. No. 10-0200      2 管
Cat. No. 10-0500      5 管
Cat. No. 10-1000      10 管                             
1.2 穩(wěn)定性與保存
Mynox在有效期（見包裝盒標簽）內(nèi)具有很強的穩(wěn)定性。應于2-8°C保存,。
運輸過程中,，應保持室溫。
1.3 其他所需的試劑及設備
標準細胞培養(yǎng)設備
培養(yǎng)基,、胎牛血清,、PBS緩沖液、胰酶
無菌培養(yǎng)皿
Venor®GeM支原體檢測試劑盒（Minerva Biolabs公司）
2.      應用及原理
不論從生物學還是經(jīng)濟學角度考慮,，去除細胞培養(yǎng)中的支原體感染,，對于基礎研究、診斷和生物技術的生產(chǎn)都是至關重要的,。應用抗生素處理是殺滅或抑制細胞培養(yǎng)中支原體污染的zui常用方法,。一般來說，抗生素治療不但不能有效持久地去除支原體,，而且,，抗生素還容易對細胞產(chǎn)生不良的細胞毒作用，并引起支原體菌株的耐藥性,。
目前,，Mynox是*種也是*可殺滅支原體的生物制劑。實驗證實,，Mynox僅使用一次即可*有效的消除支原體。
 Mynox取自枯草桿菌發(fā)酵后的提取物,。由于支原體沒有細胞壁,，只有簡單的質(zhì)膜，因此,，Mynox基于生物物理原理,，只與支原體膜特異性結合，改變支原體膜的通透性,，導致支原體破裂死亡,，而細胞膜不與Mynox結合，從而,，不會改變細胞的任何特性,，故細胞毒性極低。支原體殺死后,，細胞能夠很快恢復其正常的生長與繁殖狀態(tài),。
注意：Mynox僅限于基礎研究使用,。
3. 樣品材料
3 .1 血清濃度的重要性
反應混合物中脂肪和蛋白質(zhì)的濃度可影響Mynox消除支原體的活性，例如：胎牛血清的濃度,。這些成分可阻止Mynox與支原體膜的結合,。因此，消除細胞培養(yǎng)中的支原體,，應使用特定的標準細胞培養(yǎng)基,，例如：D-MEM或RPMI 1640培養(yǎng)基。如果使用Mynox消除污染細胞中的支原體,，胎牛血清的*濃度為5%,。如果使用Mynox消除病毒中的支原體，建議使用無血清的培養(yǎng)基,。
3.2 Mynox的使用范圍
由于Mynox不與細胞膜結合,，因此，它不能消除細胞內(nèi)的支原體污染,。然而,，支原體污染通常發(fā)生在細胞外，只有penetrans種屬的支原體能夠進入細胞內(nèi),，但是,，迄今為止，尚未有關于penetrans種屬支原體引起污染的報道,。另外,，為了減小血清對消除支原體的影響，還需制定適用于消除高蛋白,、高脂情況下的支原體污染的方案,。                 
Mynox利用生物物理的方法，與支原體膜結合,，因此,，Mynox必須直接接觸支原體，才能有效殺除,。我們建議使用胰酶消化細胞,，使細胞充分脫落分離，與Mynox充分接觸,，從而,，更有效地殺除支原體。
3.3 Mynox是否對細胞有損傷
同其他消除支原體的產(chǎn)品相比,，Mynox對于貼壁和非貼壁系細胞的影響不大,。通過對眾多細胞系的測試，我們發(fā)現(xiàn)治療后的細胞,，不但支原體被*殺除,，而且,，移種后的細胞仍然能夠保持正常的高增殖率。
4. 說明
4.1 貼壁細胞系支原體的去除
4.1.1 污染細胞和Mynox混合物的準備
在直徑為6cm的無菌培養(yǎng)皿中,，將污染細胞與Mynox混合
1.      加入2.8ml含有5%v/v胎牛血清的標準培養(yǎng)基
2.      加入Mynox 200 µl（1管）
3.      加入2 ml 細胞密度為1x104至 1x105的污染細胞
混合物總體積為5ml,。
注意：
1．確保對單一細胞進行支原體殺除（顯微鏡下觀察!）?？筛鶕?jù)需要延長胰酶消化時間,。
2．在加入污染細胞前，確保Mynox®已被添加在培養(yǎng)基中,。將污染細胞直接加入到Mynox混合物中,。
4.1.2 去除支原體
在正常細胞培養(yǎng)的條件下，將Mynox與污染細胞的混合物進行2個小時的培養(yǎng),，然后,，棄去上清液，再加入標準的細胞培養(yǎng)基,。將去除支原體后的細胞繼續(xù)進行傳代培養(yǎng),。
注意：
在污染細胞去除支原體期間，應經(jīng)常觀察Mynox對細胞的影響,。如果發(fā)現(xiàn)細胞狀態(tài)不佳,，應立即停止反應，添加標準培養(yǎng)基,，將Mynox混合物按1:5稀釋,。
4.2 懸浮細胞系支原體的去除
4.2.1 污染細胞和Mynox混合物的準備
將污染細胞與Mynox混合在無菌離心管中
1.      加入1.6ml 0.125%的胰酶和5mM EDTA PBS緩沖液
2.      加入Mynox 200 µl（1管）
3.      轉(zhuǎn)移1.6 ml含有10%v/v胎牛血清的標準培養(yǎng)基和細胞密度為1x104至 1x105的污染細胞
混合物總體積為3.4ml。
注意：
1．確保對單一細胞進行支原體殺除（顯微鏡下觀察!）,?？筛鶕?jù)需要延長胰酶消化時間。
2．在加入污染細胞前,，確保Mynox®已被添加在培養(yǎng)基中,。將污染細胞直接加入到Mynox混合物中。
3．確保離心管中污染細胞與Mynox的混合物為液態(tài),。
胰酶可防止細胞聚集。如果,，去除支原體過程中,，不需要使用胰酶進行細胞分離，可添加PBS緩沖液,，以保證細胞與Mynox混合物的總體積為3.4 ml,。
4.2.2 去除支原體
1. 室溫下，輕輕搖勻混合物2小時,。
2. 將細胞團離心5分鐘 （600 x g） 并棄去上清液,。
3. 在不含Mynox的培養(yǎng)基中將細胞重懸,。
去除支原體更有效的方法是：將污染細胞在含有Mynox的培養(yǎng)基中培養(yǎng)1代。將污染細胞加入到5 ml含有5 % v/v 胎牛血清的培養(yǎng)基和150 µl Mynox的混合物中培養(yǎng)3天,，然后,，離心并棄去上清液，再繼續(xù)在不含Mynox的培養(yǎng)基中進行傳代培養(yǎng),。
注意：
在污染細胞去除支原體期間,，應經(jīng)常觀察Mynox對細胞的影響。如果發(fā)現(xiàn)細胞狀態(tài)不佳,，應立即停止反應,，添加標準培養(yǎng)基，將Mynox混合物按1:5稀釋,。
 
4.3 無包被病毒支原體的去除
4.3.1 污染細胞和Mynox混合物的準備
凍存或新鮮的細胞以及不含細胞碎片的懸浮液均可進行支原體殺除,。病毒的滴度不影響去除效果，將污染細胞與Mynox混合在15ml無菌管中：
將污染細胞與Mynox混合在無菌離心管中
1.      加入1ml不含胎牛血清的標準培養(yǎng)基
2.      加入Mynox 100 µl
3.      將125 µl病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中
混合物總體積為1.225 ml,。
注意：
確保反應管中污染細胞與Mynox的混合物為液態(tài),。
4.3.2 去除支原體
1.      將污染細胞與Mynox的混合物室溫下培養(yǎng)2小時，并輕輕搖勻,。
2.      在培養(yǎng)基中,，將Mynox稀釋為1:10時，反應結束,。
在進行此步驟時,，可以通過去除宿主細胞系的支原體污染，同時達到去除病毒中支原體污染的目的,。zui后的體積應達到混合液體積的10倍,。
注意：
在被支原體污染之前，首先要檢測宿主細胞系是否有支原體污染,。
 
 
4.4 包被病毒支原體的去除
包被病毒外層的脂質(zhì)膜成分與支原體膜相似,，也是Mynox結合的對象。根據(jù)使用Mynox的濃度和作用時間,，這些病毒極易被Mynox殺除,。為了能夠*殺除支原體，預殺除支原體的病毒的滴度應高于106 TCID50,。
 
4.4.1 污染細胞和Mynox混合物的準備
凍存或新鮮的細胞以及不含細胞碎片的懸浮液均可進行支原體殺除,。將污染細胞與Mynox混合在15ml無菌管中：
1.      加入4.4ml不含胎牛血清的標準培養(yǎng)基
2.      加入Mynox 100 µl
3.      將0.5 ml病毒株和8%v/v的胎牛血清加入到上述混合液中
混合物總體積為5 ml。
注意：
確保反應管中污染細胞與Mynox的混合物為液態(tài),。
 
4.4.2 去除支原體
 
將污染細胞與Mynox的混合物室溫下培養(yǎng)2小時,，并輕輕搖勻。在培養(yǎng)基中，將Mynox稀釋為1:10時,，反應結束,。在進行此步驟時，可以通過去除宿主細胞系的支原體污染,，同時達到去除病毒中支原體污染的目的,。zui后的體積應達到混合液體積的10倍。
 
注意： 
在被支原體污染之前,，首先要檢測宿主細胞系是否有支原體污染,。這個支原體去除過程，可多次用于病毒株的殺除,，以確保所有支原體已被殺除,。
 
5. 支原體檢測
在不添加抗生素的情況下，經(jīng)Mynox去除的細胞培養(yǎng)物和病毒株應繼續(xù)傳代培養(yǎng)4代,，然后,，進行支原體污染的再測定。我們建議使用高敏感度的Venor®GeM支原體檢測試劑盒（Cat.-No. 11-1025/1050/1100/1250）,，以測定支原體去除的效果,。該試劑盒應用的PCR檢測法，但是,，去除支原體后,，不宜立即采用PCR檢測。因為,，Mynox可改變支原體膜的通透性,，使支原體破裂死亡，進而,，達到殺除支原體的目的,，同時，支原體DNA也會釋放到培養(yǎng)基中,，此時,，應用PCR法檢測，就可檢到支原體DNA,，從而,，造成錯誤的陽性結果。在繼續(xù)傳代培養(yǎng)1-2代后,，由于培養(yǎng)基的更換,，細胞外不再含有支原體DNA。
    
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