蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶，用于生物樣品中蛋白質的一般降解,。從林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中純化得到,。據(jù)資料顯示：該酶有兩個ca2+結合位點，它們離酶的活性中心有一定距離,，與催化機理并無直接關系,。然而，如果從該酶中除去ca2+,，由于出現(xiàn)遠程的結構變化,，催化活性將喪失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酸制品的蛋白質,。所以,，蛋白酶k消化過程中通常加入edta（以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用）。但是,，如果要消化對蛋白酶k具有較強耐性的蛋白,，如角蛋白一類，則可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的緩沖液,。在消化完畢后,、純化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至終濃度為2mmol/l,以鰲合ca2+,。

　　蛋白酶K，是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶,。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,，還具有降解天然蛋白質的能力,，因而它應用很廣泛，包括制備脈沖電泳的染色體DNA,，蛋白質印跡以及去除DNA和RNA制備中的核酸酶,。蛋白酶K的一般工作濃度是50—100μg/ml。在較廣的pH范圍內(nèi)（pH 4-12.5）均有活性,。

　　推薦反應緩沖液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2 ,。

　　蛋白酶K配制標準：20mg/ml蛋白酶K配制標準（proteinase K）：將200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，輕輕搖動,，直至蛋白酶K*溶解,。不要渦旋混合。加水定容到10ml,，然后分裝成小份貯存于-20℃,。

蛋白酶k的作用

　　值得注意的是，蛋白酶K在原位雜交技術中通常用于雜交前的處理,它具有消化包圍靶DNA蛋白質的作用,以增加探針與靶核酸結合的機會,提高雜交信號.但蛋白酶K的濃度過高,、消化時間過長或孵育溫度過高時,都會對細胞的結構有一定的破壞,導致組織切片的脫落,細胞核的消失,從而影響雜交結果.EDTA緩沖液可以替代蛋白酶K的作用,解決上述出現(xiàn)的問題,并能達到理想的染色效果.

蛋白酶k的保存

　　保存：保存在－20℃冰箱里,，避免反復凍融，有效保證12月,。

　　孵育溫度為55至65℃,，理想孵育溫度為58℃，孵育時間為15分鐘至48小時,；理想孵育時間為2小時,。

編輯本段廣泛應用

　　蛋白酶K已廣泛應用在皮革、毛皮,、絲綢,、醫(yī)藥、食品,、釀造等方面,。皮革工業(yè)的脫毛和軟化已大量利用蛋白酶，既節(jié)省時間,，又改善勞動衛(wèi)生條件,。蛋白酶還可用于蠶絲脫膠、肉類嫩化,、酒類澄清,。臨床上可作藥用,，如用胃蛋白酶治療消化不良，用酸性蛋白酶治療支氣管炎,，用彈性蛋白酶治療脈管炎以及用胰蛋白酶,、胰凝乳蛋白酶對外科化膿性創(chuàng)口的凈化及胸腔間漿膜粘連的治療。加酶洗衣粉是洗滌劑中的新產(chǎn)品,，含堿性蛋白酶,，能去除衣物上的血漬和蛋白污物，但使用時注意不要接觸皮膚,，以免損傷皮膚表面的蛋白質,，引起皮疹、濕疹等過敏現(xiàn)象,。

產(chǎn)品簡介：
貨號： GPE-2009001
批號： 201003008
規(guī)格： 每個獨立包裝中含有100毫克的蛋白酶K凍干粉
比活性值： 40 U/mg蛋白,，17.5 U/mg干粉
來源種屬： 林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）
相對分子質量：29,730
貯存條件：
干粉狀態(tài)可在2~4ºC條件下低溫保藏。使用時,，建議將每個獨立包裝的干粉全部溶解,，分裝為適當體積后，-20ºC貯存,。
正確的貯存條件下,，干粉狀態(tài)的有效期可達一年。液體狀態(tài)的有效期為半年,。打開包裝使用后,，如果在2~8ºC環(huán)境下放置超過一周時間,，建議過濾除菌后再用于實驗,。
貯存緩沖液：20 mM Tris-HCl （pH 7.4），1 mM氯化鈣,，50%甘油（稀釋用緩沖液不含甘油）,。
質量控制：
活性單位定義
37ºC、pH 7.5條件下,，每分鐘可水解底物酪蛋白生成1 μmol酪氨酸的蛋白酶K 的量,，定義為一個單位（U）。
脫氧核糖核酸酶殘留
以λ DNA為底物,，37ºC消化6小時以上,，未檢測到脫氧核糖核酸酶活性。
核糖核酸酶殘留
25ºC消化16小時以上,，未檢測到核糖核酸酶活性,。
產(chǎn)品用途：
蛋白酶K是一種用途廣泛的非特異性的絲氨酸蛋白酶。在pH 4到pH 12的條件下均有活性,，在SDS,、尿素或EDTA存在時亦很穩(wěn)定,。常用于提取mRNA、基因組DNA,，或用于從各種細胞中提純DNA和RNA時消化雜蛋白,。還可用于糖蛋白的修飾，以及蛋白質結構研究等方面,。

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