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描述: 內皮細胞生長因子（ECGF）是一種從牛大腦中提取出來的，含有能夠促進哺乳動物血管內皮細胞生長的因子,。 也有報道稱ECGF對用于單克隆抗體生產(chǎn)的雜交瘤細胞的融合和生長有一定的輔助作用,。制備內皮細胞生長因子的方法是根據(jù)Maciag等的方法（1979）修改過的,，是從含有氯化鈉和硫酸鏈霉素的溶液中無菌凍干而來的。
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）可以用傳統(tǒng)的方法進行原代培養(yǎng),。這些細胞的持續(xù)增殖已被證明是非常困難的,。牛腦中的提取物可以保證這些細胞的長期體外增殖。在細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中加入纖維連接蛋白或膠原基質可以培養(yǎng)內皮細胞,。當加入ECGF后,，在細胞培養(yǎng)液中加入胎牛血清的量可以減少。肝素可以提高ECGF有絲分裂的活性,。 有報道稱在培養(yǎng)雜交瘤和其他類型的細胞時,，加入ECGF后可以不用加入飼養(yǎng)層細胞。 
宿主: 牛
純化: 粗提物
緩沖液: H₂O, w/o 防腐劑
形式: 凍干粉 
使用說明:內皮細胞生長因子是經(jīng)過無菌凍干的,，每小瓶含6毫克蛋白,。原液的配制：用2毫升預熱（37℃）的滅菌平衡鹽溶液溶解蛋白，溫和旋轉小瓶使干粉溶解,。原液可進一步用無菌組織培養(yǎng)液稀釋到所需的工作濃度,。雖然原液可加入無菌組織培養(yǎng)液中，建議將稀釋的蛋白無菌過濾后使用,。6毫克ECGF可以加入 500毫升的培養(yǎng)基中,。 
生物活性/工作濃度: 培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞（HUVEC），ECGFzui適宜的工作濃度是50-200 μg/ml,。 加入50 μg/ml肝素后，ECGFzui適宜濃度是10 μg/ml. 作為制備單克隆抗體的輔助生長因子,，ECGF的zui適宜濃度是25- 100 μg/ml. 
種屬的特異性: 牛ECGF 可以作用于牛,，鼠和人的細胞。 
保存條件：
溶解之前保存 2-8 °C,。 溶解之后,，溶液保存在 –20 °C。
推薦將溶解后溶液保存在 -20°C,。避免反復凍融,。 
使用: 牛ECGF 只用于科研，不能應用于臨床! 
產(chǎn)品編號: 300-090-5 規(guī)格: 5x 6 mg 
參考文獻: [Maciag T (1982) JBC 257:5333; Olander J (1980) In Vitro 6:209; Folkman J (1980) Nature 288:551; Evans CH (1982) JNCI 68:127; Pintus C (1983) J Immuno Meth 61:195; Maciag T (1979) PNAS 6:5674; Thornton SC (1983) Science 222:623; Ransom JH (1986) Methods Enzymol 121:293]
ECGF 用于HUVEC細胞培養(yǎng)

ECGF用于人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）的zui適濃度范圍是100-300 μg/ml,，加入肝素(50 μg/ml)后的zui適濃度范圍是10-20 μg/ml,。作為一種生長添加物用于單克隆抗體的生產(chǎn)，zui適濃度范圍是25-100 μg/ml,。牛和豬ECGF因子對小鼠細胞,，牛細胞和人細胞起作用。

Protocol:
- 每孔中生長培養(yǎng)基(EGM)中的細胞濃度是5-7 x 10³ cells
- 隔天培養(yǎng)細胞[如果實驗很急,可以將早上培養(yǎng)的細胞下午進行換液,。將生長培養(yǎng)基換成基礎培養(yǎng)基（EBM）]
- 將生長培養(yǎng)基換成基礎培養(yǎng)基(HUVEC: 基礎培養(yǎng)基 +1-2% 胎牛血清)
- 培養(yǎng)24h
- 再次換液,，加入因子 (生長因子,，抑制劑，等等)
- 培養(yǎng)18h
- 加入10u l 3H-胸腺嘧啶溶液[0.025mCi/ml]/孔 (=0.25u Ci)
- 37°C再培養(yǎng)6h
- 洗滌步驟：(250ul/孔)
       PBS        一次
       MeOH     兩次,，每次5min
       TCA        兩次,，每次10min
       H₂O        一次
- 每孔加入250 ul 0.3M NaOH，裂解細胞
- 將2.5 ml ECO加入到相應的閃爍計數(shù)瓶中
- 將細胞裂解液加入的閃爍計數(shù)瓶中
- 用閃爍液體計數(shù)（-計數(shù)器;貝克曼儀器公司） 

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