尼龍毛柱是免疫學(xué)中一種用于分離T細(xì)胞的分離柱,。憂郁在研究體內(nèi)及體外的免疫系統(tǒng)時(shí),，分離淋巴細(xì)胞群是一個(gè)關(guān)鍵步驟,。而市場(chǎng)上并沒(méi)有針對(duì)B細(xì)胞的特異性抗血清，所以分離淋巴細(xì)胞中的T細(xì)胞并不是十分方便,。T細(xì)胞尼龍毛分離法利用了尼龍毛對(duì)B細(xì)胞的親和力,，從而使T細(xì)胞在沒(méi)有嚴(yán)重?fù)p傷的情況下達(dá)到的足夠的純度。該方法不像流式和磁珠費(fèi)用昂貴,，而且操作簡(jiǎn)便,，所需要的條件也不高，是一種非常實(shí)用的方法,。

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21759-1	Nylon Wool Fiber, Sterile		3400	1 pkg	polysiences
18369-50	Nylon Wool Fiber		3145	50g	polysiences
18369-10	Nylon Wool Fiber		1054	10g	polysiences

 

 

　　操作方法：

　　1.秤取1.5g尼龍毛裝入20-30ml玻璃容器或注射器內(nèi),，填料的體積控制在15毫升左右。因?yàn)槟猃埫乃删o關(guān)系到T細(xì)胞的回收率,，所以要特別注意,。注射器下端配接5厘米左右長(zhǎng)的帶有彈簧夾的橡皮管。　　2. 加入大量的PBS平衡柱子后,，用鋁箔包裹,，并置于適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，高壓滅菌15分鐘,。　?。ㄉ唐坊猃埫陨喜襟E可以省略，經(jīng)過(guò)PBS平衡后可以直接進(jìn)行下列步驟,。）　　3. 滅菌的尼龍毛柱垂直固定后放于超凈臺(tái)內(nèi),，頂部以鋁箔覆蓋，避免污染,。　　4. 注射器下端,，橡皮管，彈簧夾用*消毒,。打開彈簧夾調(diào)節(jié)流速在大約3-4ml/min,。　　5.首先，加入3-4倍柱體的無(wú)血培養(yǎng)基平衡,，之后加入相同體積的含有血清的培養(yǎng)基平衡（上述培養(yǎng)基都要預(yù)熱）,，zui后等培養(yǎng)基液面接近柱填料液面時(shí)，關(guān)閉彈簧夾,。　　6. 樣本細(xì)胞懸浮液濃度控制在約5×108cells/ml,，上樣量一般是1/3-1/5柱體積,。樣品加入之后,，再加入少量培養(yǎng)液，然后關(guān)閉彈簧夾,。　　7.覆蓋鋁箔,，垂直固定,，置于消毒過(guò)的容器中，于培養(yǎng)箱內(nèi)37℃孵育1小時(shí),。此過(guò)程中柱子必須要保持垂直狀態(tài),。　　8. 從培養(yǎng)箱中拿出柱子，置于超凈臺(tái)內(nèi),，除去鋁箔,。接上按照4.中的方法消毒的彈簧夾和橡皮管，加入適當(dāng)體積經(jīng)37℃預(yù)熱的培養(yǎng)基,，打開彈簧夾控制流速在3-4 mL/min,，流出約5ml之后，流出的培養(yǎng)液基變得不透明,，此時(shí)其中含有T細(xì)胞,，收集這一部分培養(yǎng)基。　　9. 基本上何時(shí)結(jié)束收集取決于流出液體中細(xì)胞的濃度,，實(shí)際上,，收集的量達(dá)到一個(gè)柱體積時(shí)就可以停止收集，因?yàn)榧词故占嗟牧?，回收率幾乎不?huì)增加,。　　10.上述操作后，細(xì)胞的　　回收率為： 15~20 %　　T細(xì)胞含量： 85~95 %　　B細(xì)胞污染率： 1 5 %　　多數(shù)細(xì)胞被確定為T細(xì)胞,。　?。ㄗⅲ┦占掣接谀猃埫系募?xì)胞時(shí)，將T細(xì)胞收集完畢后的尼龍毛再無(wú)菌操作的狀態(tài)下取出,，轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜髦?，用鑷子小心的將尼龍毛松開，粘附的細(xì)胞可以洗到培養(yǎng)基中,?；蛘邔⒆⑸淦餍静迦胱⑸淦鲀?nèi)，通過(guò)壓力使的粘附的細(xì)胞隨著液體流出,。