尼龍毛柱是免疫學中一種用于分離T細胞的分離柱。憂郁在研究體內及體外的免疫系統(tǒng)時,，分離淋巴細胞群是一個關鍵步驟,。而市場上并沒有針對B細胞的特異性抗血清，所以分離淋巴細胞中的T細胞并不是十分方便,。T細胞尼龍毛分離法利用了尼龍毛對B細胞的親和力,，從而使T細胞在沒有嚴重損傷的情況下達到的足夠的純度。該方法不像流式和磁珠費用昂貴,，而且操作簡便,，所需要的條件也不高,，是一種非常實用的方法。

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21759-1	Nylon Wool Fiber, Sterile		3400	1 pkg	polysiences
18369-50	Nylon Wool Fiber		3145	50g	polysiences
18369-10	Nylon Wool Fiber		1054	10g	polysiences

 

 

　　操作方法：

　　1.秤取1.5g尼龍毛裝入20-30ml玻璃容器或注射器內,，填料的體積控制在15毫升左右,。因為尼龍毛的松緊關系到T細胞的回收率，所以要特別注意,。注射器下端配接5厘米左右長的帶有彈簧夾的橡皮管,。　　2. 加入大量的PBS平衡柱子后，用鋁箔包裹,，并置于適當?shù)娜萜鲀?，高壓滅?5分鐘。　?。ㄉ唐坊猃埫陨喜襟E可以省略,，經(jīng)過PBS平衡后可以直接進行下列步驟。）　　3. 滅菌的尼龍毛柱垂直固定后放于超凈臺內,，頂部以鋁箔覆蓋,，避免污染。　　4. 注射器下端,，橡皮管,，彈簧夾用*消毒。打開彈簧夾調節(jié)流速在大約3-4ml/min,。　　5.首先,，加入3-4倍柱體的無血培養(yǎng)基平衡，之后加入相同體積的含有血清的培養(yǎng)基平衡（上述培養(yǎng)基都要預熱）,，zui后等培養(yǎng)基液面接近柱填料液面時,，關閉彈簧夾。　　6. 樣本細胞懸浮液濃度控制在約5×108cells/ml,，上樣量一般是1/3-1/5柱體積,。樣品加入之后，再加入少量培養(yǎng)液,，然后關閉彈簧夾,。　　7.覆蓋鋁箔，垂直固定,，置于消毒過的容器中,，于培養(yǎng)箱內37℃孵育1小時。此過程中柱子必須要保持垂直狀態(tài),。　　8. 從培養(yǎng)箱中拿出柱子,，置于超凈臺內，除去鋁箔。接上按照4.中的方法消毒的彈簧夾和橡皮管,，加入適當體積經(jīng)37℃預熱的培養(yǎng)基,，打開彈簧夾控制流速在3-4 mL/min，流出約5ml之后,，流出的培養(yǎng)液基變得不透明,，此時其中含有T細胞，收集這一部分培養(yǎng)基,。　　9. 基本上何時結束收集取決于流出液體中細胞的濃度,，實際上，收集的量達到一個柱體積時就可以停止收集,，因為即使收集更多的量,，回收率幾乎不會增加。　　10.上述操作后,，細胞的　　回收率為： 15~20 %　　T細胞含量： 85~95 %　　B細胞污染率： 1 5 %　　多數(shù)細胞被確定為T細胞,。　　（注）收集粘附于尼龍毛上的細胞時,，將T細胞收集完畢后的尼龍毛再無菌操作的狀態(tài)下取出,，轉移到適當?shù)娜萜髦校描囎有⌒牡膶⒛猃埫砷_,，粘附的細胞可以洗到培養(yǎng)基中,。或者將注射器芯插入注射器內,，通過壓力使的粘附的細胞隨著液體流出,。