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技術(shù)文章

緩沖液如何配制

點(diǎn)擊次數(shù):8703 發(fā)布時(shí)間:2013-9-24

1包被緩沖液,,

(1)碳酸鹽緩沖液(PH9.6 +0.2  0.05M) 《激素酶免疫測(cè)定技術(shù)》石老師編著

           Na2CO31.59g

      NaHCO3        2.93g

加蒸餾水至1000ml,。

(2)tris緩沖液(0.05mol/L)50ml 0.1mol/L

(Tris)溶液與x ml 0.1mol/L 鹽酸混勻后,,加水稀釋至100ml        《酶免疫測(cè)定技術(shù)》楊立國(guó)等編著

各種pH值的Tris緩沖液的配制 

所需pH值(25℃)

0.1mol/L HCl的體積

7.1

45.7

7.2

44.7

7.3

43.4

7.4

42.0

7.5

40.3

7.6

38.5

7.7

36.6

7.8

34.5

7.9

32.0

8.0

29.2

8. 1

26.2

8.2

22.9

8.3

19.9

8.4

17.2

8.5

14.7

8.6

12.4

8.7

10.3

8.8

8.5

8.9

7.0

某一特定pH值的0.05mol/L Tris緩沖液的配制:將50ml 0.1mol/L Tris堿溶液與上表所示相應(yīng)體積(單位:ml)的0.1ml/L HCl混合,,加水將體積調(diào)至100ml

0.1mol/L鹽酸的配置:

   買來的濃鹽酸是 12 mol/L的,,以配制1L 0.1mol/L的鹽酸為例:

先用量筒量取8.3 mL的濃鹽酸倒入容量瓶,,然后將溶液加蒸餾水稀釋至體積為1 L,此時(shí)的溶液就是0.1mol/L的鹽酸,。

 

0.1mol/Ltris的配置:0.1 mol/L溶液為12.114 g/L

則 配制600mlTris緩沖液的方法:

         三羥甲基氨基甲烷: 3.6g

         濃鹽酸:           2.09ml

 

 

3)0.02mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.4)

磷酸二氫鉀        0.2g

磷酸氫二鈉        2.90g

氯化鈉            8g

加去離子水定容到1000ml,。

2洗滌緩沖液(pH7.4   0.15mol/L)   《激素酶免疫測(cè)定技術(shù)》石老師編著

0.05%Tween-20       0.5ml

加在PBS緩沖液1000ml中。

PBS緩沖液:

      KH2PO4            0.2g

      Na2HPO4·12H2O    2.9g

      NaCl               8.0g

      KCl               0.2g

    加蒸餾水至1000ml,。

3測(cè)定緩沖液(Ph7.0  含0.87﹪NaCl 和0.1﹪BSA的0.1M磷酸緩沖液)用于標(biāo)準(zhǔn)孕酮,,孕酮酶標(biāo)物及奶樣的稀釋。   《激素酶免疫測(cè)定技術(shù)》石老師編著

        Na2HPO4·12H2O    21.85g

         NaH2PO4·2H2O      6.08g

         NaCl               8.70g

BSA               1.00g

溶于1000mL蒸餾水中

4封閉緩沖液

牛血清白蛋白(BSA)   2%    2g

     ?。ɑ?%脫脂奶粉)加洗滌緩沖液100 ml,。

 

 

0.05mol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.6)+2.0%BSA

2.0gBSA加配好的0.05mol/L碳酸鹽緩沖液溶解定量至100ml

5底物緩沖液(pH5.4)磷酸鹽-檸檬酸緩沖液

     0.2M  Na2HPO4(無水28.4g/L,帶12結(jié)晶水71.7g/L) 取25.7ml

   0.1M  檸檬酸(無水19.2g/L,,帶1結(jié)晶水21.01g/L)   取24.3ml

 加蒸餾水至100ml,。

 

檸檬酸(C6H8O7·H2O)    0.47g

Na2HPO4·12H2O               2.00g

6(1) TMB(四甲基聯(lián)苯胺)顯色液(藍(lán)色)

A液(3,3’,,5,,5’-四甲基聯(lián)苯胺,TMB):稱取TMB20mg溶于10ml無水乙醇中,,*溶解后,,加雙蒸水至100ml。

B液(0.1mol/L檸檬酸-0.2mol/L磷酸氫二鈉緩沖液,,pH5.0-5.4):稱取Na2HPO4·12H2O14.34g,檸檬酸1.87g溶于180ml雙蒸水,,加0.75%過氧化氫尿素1.28ml,,定容至200ml,調(diào)pH至5.0-5.4,。

將A液和B液按1:l混合后即成TMB-過氧化氫尿素應(yīng)用液

TMB(2mg/ml水)          0.05ml

        底物緩沖液            0.95ml

        30%  H2O2           0.001ml

            總體積1ml,。

(2)OPD(鄰苯二胺)顯色液(黃棕色)(現(xiàn)配避光)

  OPD(干粉)             0.004g

  底物緩沖液                10ml

  30%  H2O2                    0.015ml

 總體積10ml。

(3)TMBS底物液(用于顯色)  《激素酶免疫測(cè)定技術(shù)》石老師編著

10mg四甲基聯(lián)苯胺硫酸鹽(TMBS)的二甲基亞砜溶液,用底物緩沖液配成0.2mg/ml的TMBS底物液,。用前加H2O2溶液30﹪左右,。

終止液  2mol/LH2SO4   用于終止反應(yīng)

 在178.3ml水中,逐滴加入濃硫酸(18M,,約98%)21.7ml,,邊加邊搖。(濃H2SO4:蒸餾水=1:9)

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