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商鋪:http://sorrent.com.cn/st178406/
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技術(shù)文章
圖解blast驗(yàn)證引物教程
點(diǎn)擊次數(shù):7135 發(fā)布時間:2012-6-10
http://www.genecool.com/?fromuser=%E6%9D%A8%E5%BB%BA%E8%BE%89
圖解blast驗(yàn)證引物教程
——以文獻(xiàn)報道的人類的ABCG2的引物為例
1,、 進(jìn)入網(wǎng)頁:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/
2、 點(diǎn)擊Basic BLAST中的nucleotide blast選項(xiàng)
3,、 完成2操作后就進(jìn)入了Basic Local Alignment Search Tool界面
(1)在Enter Query Sequence欄中輸入引物序列:
注:文獻(xiàn)報道ABCG2的引物為5’-CTGAGATCCTGAGCCTTTGG-3’;
5’-TGCCCATCACAACATCATCT-3’
簡便的做法是同時輸入上下游引物,。輸入上下游引物系列都從5’— 3’,。 輸入上游引物后,,加上≥20個字母n,再輸入下游引物,,如下圖:
(2)在Choose Search Set欄中:
Database根據(jù)預(yù)操作基因的種屬定了,,本引物可選Human genomic + transcript或Others (nr etc.)。本人傾向于選后者,,覺得此庫信息更多,。如下圖:
(3)在Program Selection中:選擇Somewhat similar sequences (blastn)項(xiàng),如下圖:
(4)在此界面zui下面:如下圖
Show results in a new window項(xiàng)是顯示界面的形式,,可選可不選,,在此我們選上了。關(guān)鍵要點(diǎn)擊Algorithm parameters參數(shù)設(shè)置,,進(jìn)入?yún)?shù)設(shè)置界面,。
4. 參數(shù)設(shè)置:
(1)在General Parameters中:Expect thresshold期望閾值須改為1000,大于1000也可以,;在Word size的下拉框?qū)?shù)字改為7,。如下圖:
(2)Scoring Parameters無須修改
(3)Filters and Masking中,一般來說也沒有必要改
5.點(diǎn)擊zui下面一欄的BLAST按鈕,,如圖:
6.點(diǎn)擊BLAST按鈕后,,跳轉(zhuǎn)出現(xiàn)如下界面:
7. 等待若干秒之后,自動跳轉(zhuǎn)出現(xiàn)顯示BLAST結(jié)果的網(wǎng)頁,。該網(wǎng)頁用三種形式來顯示blast的結(jié)果,。
(1)圖形格式: